MicroRNA--9-eIF5A2通路在非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究的目的是驗證eIF5A2基因在非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及其機(jī)制，并進(jìn)一步探討MicroRNA-9/eIF5A2通路在調(diào)控非小細(xì)胞肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移和順鉑耐藥中的作用及其機(jī)制
　　方法：
　　1.選擇4種非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549、HCC827、NCI-H358、NCI-H1299)，利用Western-blot和RT-PCR技術(shù)檢測eIF5A2的表達(dá)，選取eIF5A2高表達(dá)的NCI-H12

2、99細(xì)胞和eIF5A2低表達(dá)的A549細(xì)胞，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞系中eIF5A2表達(dá)，觀察其遷移侵襲能力的變化。
　　2.采用TGF-β1誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生EMT，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞系中eIF5A2表達(dá)，檢測肺癌細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平、遷移侵襲能力的變化。
　　3.采用GC7（eIF5A2抑制劑）抑制A549、NCI-H1299肺癌細(xì)胞eIF5A2的表達(dá)，細(xì)胞活力檢測試劑盒(CCK-8)檢測

3、肺癌細(xì)胞對順鉑化療敏感性的變化，采用RNAi干擾技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞系中eIF5A2表達(dá)，Western-blot和免疫熒光技術(shù)檢測EMT標(biāo)志物表達(dá)的變化。
　　4.檢測A549、NCI-H1299肺癌細(xì)胞miR-9的表達(dá)，采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分別上調(diào)/下調(diào)肺癌細(xì)胞中miR-9的表達(dá)，劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測肺癌細(xì)胞遷移侵襲能力的變化，RT-PCR檢測eIF5A2表達(dá)水平的變化，Wes

4、tern Blot檢測EMT標(biāo)志物表達(dá)水平的變化。
　　5.采用miR-9mimic和miR-9inhibitor分別上調(diào)/下調(diào)A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌細(xì)胞中miR-9的表達(dá)，CCK-8檢測試劑盒、EDU法、流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測肺癌細(xì)胞經(jīng)順鉑化療后細(xì)胞活力、增殖能力和凋亡水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.A549肺癌細(xì)胞eIF5A2低表達(dá)、NCI-H1299肺癌細(xì)胞eIF5A2高表達(dá)，eIF5

5、A2siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能顯著下調(diào)eIF5A2的表達(dá)，而eIF5A2的表達(dá)水平和肺癌細(xì)胞的遷移侵襲能力呈正相關(guān)。
　　2.通過下調(diào)A549肺癌細(xì)胞eIF5A2表達(dá)，能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞的EMT過程，從而降低肺癌細(xì)胞的遷移侵襲能力。
　　3.A549、NCI-H1299肺癌細(xì)胞eIF5A2的表達(dá)水平與順鉑的化療敏感性呈負(fù)相關(guān)，而eIF5A2通過調(diào)控EMT過程從而調(diào)控肺癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性。
　　4.A549

6、、NCI-H1299肺癌細(xì)胞中miR-9的高表達(dá)能下調(diào)eIF5A2的表達(dá)，并通過逆轉(zhuǎn)EMT過程降低肺癌細(xì)胞的遷移侵襲能力。
　　5.A549、NCI-H1299、NCI-H358肺癌細(xì)胞中miR-9的表達(dá)與順鉑的化療敏感性呈正相關(guān)，miR-9的高表達(dá)通過下調(diào)eIF5A2的表達(dá)，并逆轉(zhuǎn)EMT過程提高肺癌細(xì)胞對順鉑化療的敏感性。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中eIF5A2表達(dá)水平與侵襲轉(zhuǎn)移能力呈正相