NCOA2核心啟動(dòng)子甲基化分析及其與不同脂肪組織差異表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、NCOA2是類固醇受體輔激活因子家族成員之一，作為一種PPARr輔激活因子，在脂類代謝及能量平衡中發(fā)揮著重要的作用。對(duì)NCOA2基因表達(dá)調(diào)控的組織差異性進(jìn)行研究，有助于深入了解豬不同部位脂肪沉積機(jī)理，為豬的選育提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
　　1、豬NCOA2基因上游調(diào)控區(qū)序列分析及核心啟動(dòng)子區(qū)的驗(yàn)證
　　本試驗(yàn)首先通過生物信息學(xué)分析獲得豬NCOA2基因上游調(diào)控區(qū)序列，并預(yù)測(cè)分析了該區(qū)域內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，預(yù)測(cè)了CdxA、TA

2、TA、SRY、Nkx-2、GATA-X、Sox-5、AML-1a、MZF1等多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件和結(jié)合位點(diǎn)。通過構(gòu)建上游調(diào)控序列系列缺失表達(dá)載體，利用雙熒光報(bào)告系統(tǒng)確定了NCOA2基因的核心啟動(dòng)子區(qū)，結(jié)果表明，NCOA2基因核心啟動(dòng)子區(qū)位于-483～+9。
　　2、豬NCOA2基因核心啟動(dòng)子區(qū)甲基化分析
　　DNA甲基化作為脊椎動(dòng)物DNA唯一的自然化學(xué)修飾方式，對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控發(fā)揮著重要的作用。而基因啟動(dòng)子區(qū)尤其是核心啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)

3、的CpG甲基化與轉(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)控有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)基于豬皮下脂肪組織、腎周脂肪組織和肌內(nèi)脂肪組織中NCOA2基因表達(dá)水平的差異，采用BSP甲基化檢測(cè)技術(shù)對(duì)不同組織之間NCOA2基因核心啟動(dòng)子區(qū)序列進(jìn)行了甲基化檢測(cè)。結(jié)果如下:
　　利用亞硫酸氫鹽測(cè)序(BSP)這一甲基化檢測(cè)法檢測(cè)了豬NCOA2基因核心啟動(dòng)子區(qū)目的片段，甲基化分析發(fā)現(xiàn)，皮下脂肪組織、腎周脂肪組織及肌內(nèi)脂肪組織中的25個(gè)CpG位點(diǎn)組織間無差異，均未發(fā)生甲基化，說明NCO

4、A2基因在皮下脂肪組織、腎周脂肪組織及肌內(nèi)脂肪組織之間的表達(dá)差異是與其核心啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平不相關(guān)的，即并不是由于組織間的甲基化水平的差異引起的組織間表達(dá)水平的差異。
　　3、豬種間NCOA2啟動(dòng)子區(qū)變異分析
　　二花臉豬作為一個(gè)地方豬種，具有肌內(nèi)脂肪含量較高的特點(diǎn)，本試驗(yàn)針對(duì)二花臉豬與外種三元商品豬之間肌內(nèi)脂肪含量的差異，分析了NCOA2基因的表達(dá)水平，進(jìn)一步研究了兩個(gè)豬種間NCOA2基因啟動(dòng)子區(qū)序列的差異。結(jié)果如下:二花