NCOA2核心啟動子甲基化分析及其與不同脂肪組織差異表達的關系.pdf

1、NCOA2是類固醇受體輔激活因子家族成員之一，作為一種PPARr輔激活因子，在脂類代謝及能量平衡中發(fā)揮著重要的作用。對NCOA2基因表達調(diào)控的組織差異性進行研究，有助于深入了解豬不同部位脂肪沉積機理，為豬的選育提供理論依據(jù)和技術支持。
　　1、豬NCOA2基因上游調(diào)控區(qū)序列分析及核心啟動子區(qū)的驗證
　　本試驗首先通過生物信息學分析獲得豬NCOA2基因上游調(diào)控區(qū)序列，并預測分析了該區(qū)域內(nèi)的轉錄因子結合位點，預測了CdxA、TA

2、TA、SRY、Nkx-2、GATA-X、Sox-5、AML-1a、MZF1等多種轉錄調(diào)控元件和結合位點。通過構建上游調(diào)控序列系列缺失表達載體，利用雙熒光報告系統(tǒng)確定了NCOA2基因的核心啟動子區(qū)，結果表明，NCOA2基因核心啟動子區(qū)位于-483～+9。
　　2、豬NCOA2基因核心啟動子區(qū)甲基化分析
　　DNA甲基化作為脊椎動物DNA唯一的自然化學修飾方式，對基因表達的調(diào)控發(fā)揮著重要的作用。而基因啟動子區(qū)尤其是核心啟動子區(qū)內(nèi)

3、的CpG甲基化與轉錄的負調(diào)控有著密切的關系。本試驗基于豬皮下脂肪組織、腎周脂肪組織和肌內(nèi)脂肪組織中NCOA2基因表達水平的差異，采用BSP甲基化檢測技術對不同組織之間NCOA2基因核心啟動子區(qū)序列進行了甲基化檢測。結果如下:
　　利用亞硫酸氫鹽測序(BSP)這一甲基化檢測法檢測了豬NCOA2基因核心啟動子區(qū)目的片段，甲基化分析發(fā)現(xiàn)，皮下脂肪組織、腎周脂肪組織及肌內(nèi)脂肪組織中的25個CpG位點組織間無差異，均未發(fā)生甲基化，說明NCO

4、A2基因在皮下脂肪組織、腎周脂肪組織及肌內(nèi)脂肪組織之間的表達差異是與其核心啟動子區(qū)甲基化水平不相關的，即并不是由于組織間的甲基化水平的差異引起的組織間表達水平的差異。
　　3、豬種間NCOA2啟動子區(qū)變異分析
　　二花臉豬作為一個地方豬種，具有肌內(nèi)脂肪含量較高的特點，本試驗針對二花臉豬與外種三元商品豬之間肌內(nèi)脂肪含量的差異，分析了NCOA2基因的表達水平，進一步研究了兩個豬種間NCOA2基因啟動子區(qū)序列的差異。結果如下:二花