IKK-NF-κB通路在肝臟缺血再灌注復合內(nèi)毒素血癥損傷中的作用及PDTC的保護機制.pdf

1、該實驗試圖從與NF-κB活化最密切的IKK-β入手,進一步探討PDTC的抗炎機理.該實驗通過HIR和內(nèi)毒素(ET)雙重打擊制備大鼠急性肝臟損傷(ALI)模型,觀察肝臟組織中IKK-β的表達、NF-κB的活化情況以及NF-κB的下游因子TNF-α及IL-6的表達,探討IKK-β、NF-κB在HIR致ALI的病理機制中的作用;同時觀察PDTC對ALI的保護作用,從分子水平探討PDTC的抗炎機理,以證實干預IKK-NF-κB信號通路可能是防止

2、HIR后ALI的發(fā)生發(fā)展一個有效的途徑,為臨床HIR后ALI的預防和治療提供實驗基礎.方法:試驗選擇Wister大鼠隨機分為:對照組(A組);HIRE組(B組);HIRE+PDTC組(C組).每組20只.手術方法:采用乙醚吸入麻醉,腹部正中切口,顯露肝左葉及肝中葉肝動脈和門靜脈.B組用無損傷動脈夾阻斷肝左葉及肝中葉之入肝血流,缺血時間為1h,阻斷開放時自陰莖背靜脈注射大腸桿菌脂多糖(LPS)2.5 mg·kg<'-1>;C組先經(jīng)陰莖背靜

3、脈注射PDTC 120 mg·kg<'-1>后立即依B組方法致傷;A組僅行腹部正中切口,顯露肝中葉及肝左葉肝蒂,不阻斷,陰莖背靜脈注射無菌生理鹽水1ml.分別于再灌注后1,3,6,12h四個時間點處死動物,取材(每時間點5只).分別采用原位雜交(ISH)、非變性凝膠遷移電泳(EMSA)及免疫組化(IH)法檢測肝臟組織中IKK-β表達、NF-κB活性、TNF-α及IL-6的表達,并檢測血漿中ALT含量,蘇木精-伊紅(HE)染色光學顯微鏡下

4、觀察肝臟組織病理變化.結(jié)論:(1)機體受到HIR和ET刺激后,可增加IKK-β的表達,促進NF-κB的活化和核移位,從而上調(diào)TNF-α的基因轉(zhuǎn)錄;TNF-α作為細胞因子網(wǎng)絡的啟動因子,進一步引起IL-6等一系列炎癥介質(zhì)的繼發(fā)性釋放,誘發(fā)ALI.說明IKK-β是肝臟缺血再灌注損傷的關鍵環(huán)節(jié);TNF-α在炎癥瀑布反應的啟動中發(fā)揮重要作用,IL-6在組織炎性損傷過程中具有重要作用.(2)PDTC的抗炎作用機理可能是通過減少IKK-β的表達,下