EGFR基因與卡波氏肉瘤相關(guān)性的研究.pdf

1、石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文EGFR基因與卡波氏肉瘤相關(guān)性的研究姓名：張慧申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：楊磊;黃瑾20090601A b s t r a c t．O —b j e c t i v e ：．T h ep u r p o s e o f t h i ss t u d yi st op r o b e i n t ot h ef u n c t i o n o f E G F R i n t u m o r

2、i g e n e s i s a n dd e v e l o p m e n t o f l 岱．a(chǎn) n dt h e p o s s i b l em e c h a n i s m i nK S p a t h o g e n e s i s b yu s i n g m o l e c u l a r b i o l o g ya n d c e l lb i o l o g y m e t h o d s ．—M —e —t

3、 —h —o —d —s —：A f t e rH H 一8 p o s i t i v ec e l l s ( B C B L l ) a n d H H V - 8 n e g a t i v ec e l l s ( B J A B ) w e r er e s p e c t i v e l y e x p o s e d i n v i t r ot o a s e r i e so f d i f f e r e n t

4、c o n c e n t r a t i o n s o f E G F R - s p e c i f i c i n h i b i t o r( T y r o p h o s t i nA G l 4 7 8 ) a n d E G F R —c o m m o n l y u s e d a c t i v a t o r ( R e c o m b i n a n tH u m a n E G F ，r h E G F )

5、 ，t h ea b o v e - m e n t i o n e d c e l l so r p h o l o g i cc h a n g e w e r e o b s e r v e d b y l i g h tm i c r o s c o p ，C C K - 8 a s s a yW a s e m p l o y e d t oi n v e s t i g a t e t h ee f f e c t s d

6、o n eb y A G l 4 7 8 a n d r h E G F o nt h e g r o w t ha n dp r o l i f e r a t i o na b i l i t y ，W e s t e r nb l o t t i n g w a g e m p l o y e d t od e t e c t t h ee x p r e s s i o n o f A k t a n d p - A k t i

7、 nB C B L l c e l l s ．E u k a r r r y o t i c e x p r e s s i o nv e c t o rc o n t a i n i n gH u m a n H e r p e s v i r u s 8 ( i - i I 臣V 一8 ) K l g e n eW a s t r a n s f e c t e di n t oB J A B c e l l sb y L i p

8、o f e c t a o n m i n e2 0 0 0 ．T h e m R N A l e v e l o f t h eE G F R g e n ew a s e x a m i n e d b y r e a l —t i m eP C R a n d t r a n s f e c t i o n a le f f e c t i v e n e s sw a s i d e n t i f i e db yw e s

9、t e r n b l o t ．C o m p a r a t i v e C T m e t h o d W a s u s e d t oa n a l y s i s r e l a t i v ee x p r e s s i o n o f E G F R g e n e ．．R ．．．．e ．．．s ．．u ．．．．1 ．．t ．．s ．．：．C C K - 8 a s s a ya n d F l o wc y t o

10、m e t r i c a n a l y s i sw e r e u s e dt o d e t e c t t h ee f f e c t sd o n e b yA G l 4 7 8 a n d r h E G F o n p r o l i f e r a t i o n r a t ea n d s u r v i v a lr a t ea f t e rB C B L l a n dB J A B w e r er

11、 e s p e c t i v e l ye x p o s e d i nv i t r ot o A G l 4 7 8 a n d r h E G F f o r 4 8 h o u r s ．T h e r e s u l t ss h o w e d t h a tc e l lp r o l i f e r a t i o n r a t ei n c r e a s e d w i t h t h e c o n c e

12、 n t r a t i o no f r h E G F ，s u r v i v a l r a t ed e c r e a s e d w i t ht h ec o n c e n t r a t i o no f A G l 4 7 8 a n d a l s os h o w e d t h a tt h ep r o l i f e r a t i o n r a t ea n d s u r v i v a lr a

13、t eo f t h o s e c e l l si ne x p e r i m e n t a l g r o u p sw e r e h i g h e rt h a n t h a to f c o n t r o lu n d e r a l lc o n c e n t r a t i o no f A G l 4 7 8 a n dr h E G F ．T h e d i f f e r e n c eo f p r