基于化合物庫(kù)高通量篩選技術(shù)的東海海洋真菌100102A的研究.pdf

1、本論文通過(guò)三種生物模型測(cè)試方法進(jìn)行中國(guó)東海海洋真菌活性菌株篩選，確定一株活性菌株100102A為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定，基于化合物庫(kù)高通量篩選方法，對(duì)海洋真菌100102A中的活性次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行篩選分離研究。本文主要得出如下結(jié)論:
　　(1)對(duì)來(lái)源于中國(guó)東海海域海水的10株海洋真菌進(jìn)行體外抗氧化活性、抗腫瘤活性及胰蛋白酶抑制活性的篩選，篩選出2株具有較好生物活性的海洋真菌（2株菌株編號(hào)分別為:12010101和0801010

2、1），在濃度為2 mg·mL-1時(shí)，2株真菌對(duì)DPPH自由基的清除率均超過(guò)90％，對(duì)胰蛋白酶抑制活性超過(guò)45％;而當(dāng)濃度為100μg·mL-1時(shí)，2株菌株對(duì)PC12、HepG2、U937腫瘤細(xì)胞的抑制率均高于90％。
　　(2)確定其中1株對(duì)U937腫瘤細(xì)胞具有高抑制活性的菌株100102A為研究對(duì)象，采用18sRNA菌種鑒定方法確定該菌株為分枝孢子菌屬真菌球孢枝孢（Cladosporium sphaerospermum）。

3、>　　(3)海洋真菌球孢枝孢（C.sphaerospermum）大規(guī)模發(fā)酵50 L，通過(guò)溶劑萃取法制備浸膏10 g。通過(guò)HPLC給出的化合物庫(kù)與抗氧化清除自由基DPPH活性和抗腫瘤活性比較分析，建立活性分子導(dǎo)向識(shí)別譜，首次對(duì)該菌株進(jìn)行抗腫瘤活性成分的導(dǎo)向分離。
　　(4)依據(jù)活性分子導(dǎo)向識(shí)別譜，在最佳的HPLC條件下，采用制備色譜柱進(jìn)行培養(yǎng)液中的微量活性成分的分離，最終從培養(yǎng)液浸膏中分離得到化合物1-7，分別鑒定為:3-異戊基六氫

4、吡咯并[1，2-a]吡嗪-1，4-二酮(1)、3-甲基-丁氧基苯(2)、6-羥基-5-癸酮(3)、4-丁基5,6-二氫-2-吡喃酮(4)、C18不飽和脂肪酸酯(5)、鄰苯二甲酸二異辛酯(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)。其中化合物1-7均是首次從該真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物中分離得到，活性實(shí)驗(yàn)表明化合物7對(duì)U937腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制作用，IC50值為198±0.16μg·mL-1?；衔?、4、5也表現(xiàn)出較弱的抑制作用。此外化合物1-7均對(duì)DP