肺心舒對野百合堿誘導(dǎo)肺心病肺動脈高壓大鼠影響的藥效機制研究.pdf

1、目的：
　　 慢性肺源性心臟病是嚴(yán)重危害人體健康的常見病、多發(fā)病，其發(fā)病率呈上升趨勢，80％～90％由慢性阻塞性肺疾?。–OPD）引起，已引起醫(yī)學(xué)界的廣泛重視。肺動脈高壓是慢性肺源性心臟病發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)，其產(chǎn)生及嚴(yán)重程度明顯影響著COPD和肺心病的病程及預(yù)后。肺血管構(gòu)型重塑是造成肺血管阻力持續(xù)升高和肺動脈高壓發(fā)生、發(fā)展的主要原因。如何降低肺動脈高壓，逆轉(zhuǎn)肺血管重塑是當(dāng)前肺心病或肺血管病研究的重要內(nèi)容之一。
　　 肺

2、動脈高壓的發(fā)生涉及細(xì)胞異常、分子介質(zhì)和遺傳因素等多個途徑，內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血小板等多種細(xì)胞異常參與其形成，多種血管活性物質(zhì)的失衡促進(jìn)其發(fā)生，遺傳因素在其發(fā)病中也起重要作用。
　　 目前對肺動脈高壓肺血管重塑機理的研究深入到細(xì)胞因子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的層面，但對這些細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究多是在單一因子水平進(jìn)行，對因子之間的級聯(lián)通路的研究尚未完全明了。因此各種細(xì)胞生長因子在肺動脈高壓及肺血管重構(gòu)過程中的作用日益受到人們

3、的關(guān)注。
　　 在肺動脈高壓的治療上，目前尚無較成熟的治療藥物和措施，而中醫(yī)藥治療肺心病肺動脈高壓在臨床工作中顯示出了獨特的優(yōu)勢，中醫(yī)理論研究認(rèn)為久病肺虛為肺心病發(fā)病的重要前提，感受外邪為其發(fā)病主要的誘發(fā)因素，疾病的發(fā)生發(fā)展與肺、脾、腎、心的關(guān)系密切，臟腑功能失調(diào)是加重病情、病程進(jìn)展的主要原因，痰濁與瘀血交阻是肺心病肺動脈高壓的主要病理基礎(chǔ)，本虛與標(biāo)實是其病機的主要特點。虛、痰、瘀貫穿疾病的自始至終。
　　 本研究針對病

4、機，總結(jié)張靜生導(dǎo)師多年臨床經(jīng)驗，結(jié)合現(xiàn)代藥理研究，采用益氣、活血、化痰法，擬定中藥復(fù)方肺心舒，用于治療慢性肺源性心臟病肺動脈高壓癥，并通過觀察肺心舒對野百合堿致肺心病肺動脈高壓大鼠肺血管內(nèi)皮功能、肺血管重塑的影響以及肺心舒對野百合堿致肺心病肺動脈高壓大鼠肺組織血管中VEGF、TGF-β1/Smad4傳導(dǎo)通路分子表達(dá)的影響兩個層面，從整體、器官、分子等不同水平，從形態(tài)學(xué)、病理學(xué)、功能、代謝等多方面探討野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺心病肺動脈高壓的部分

5、發(fā)病機制以及肺心舒干預(yù)肺心病肺動脈高壓的可能的起效途徑和作用靶點，為中藥復(fù)方制劑治療肺心病肺動脈高壓的深入研究，也為抗肺動脈高壓新藥的開發(fā)提供一定的理論和實驗依據(jù)。充分體現(xiàn)中醫(yī)藥的作用優(yōu)勢。
　　 材料與方法：
　　 1肺心舒對野百合堿致肺心病肺動脈高壓大鼠肺血管內(nèi)皮功能及肺血管重塑的影響
　　 本課題選用野百合堿（MCT）誘導(dǎo)的大鼠慢性炎性肺動脈高壓動物模型，模擬腫心病急性發(fā)作期肺動脈高壓。選用105只健康雄性

6、Wister大鼠，按隨機法均分為7組，即空白對照組、模型對照組、肺心舒高劑量組、肺心舒低劑量組、肺心舒預(yù)防組、西藥對照組、中西藥聯(lián)合組。每組15只。第1天，空白對照組皮下注射生理鹽水2ml/kg，其余6組均腹腔注射野百合堿60mg/kg制模?？瞻讓φ战M、模型對照組于第2-30天每日一次蒸餾水10ml/kg灌胃：預(yù)防組第2-30天每日一次肺心舒煎劑（生藥量1.4g/ml）10ml/Kg灌胃。中藥高、低劑量組、西藥對照組、中西藥聯(lián)合組于第2

7、-15天每日一次蒸餾水10ml/Kg灌胃；第16-30天肺心舒高、低劑量組每日一次肺心舒煎劑高劑量（生藥量5.6g/ml）、低劑量（生藥量1.4g/ml），10ml/Kg灌胃。西藥對照組每日一次硝苯地平20mg/kg，10ml/Kg灌胃。中西藥聯(lián)合組每日一次硝苯地平20mg/kg+肺心舒煎劑（生藥量1.4g/ml）10ml/Kg灌胃。
　　 通過對各組大鼠的一般情況與生存率、體重變化情況、肺動脈壓（mPAP）及右室壓（RSVP）

8、、右心指數(shù)[RV/（LV+S）]和右室/體重（RV/BW）比、血ET-1和NO水平、肺血管病理形態(tài)學(xué)變化（采用HE染色及病理圖象分析系統(tǒng)觀察肺小動脈形態(tài)學(xué)改變及對肺小動脈管壁厚度與血管外徑百分比（T/D）、管壁面積與血管面積（W/V）百分比進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析）的研究，觀察肺心舒對肺心病肺動脈高壓模型大鼠整體形態(tài)、生理、病理形態(tài)學(xué)、功能、代謝等方面的影響。
　　 數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（X±S）表示，采用SPSS15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行

9、單因素方差分析，各組間兩兩比較采用LSD法，以P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2肺心舒對肺心病肺動脈高壓模型大鼠肺組織VEGF、TGF-β1/Smad4傳導(dǎo)通路分子表達(dá)的影響
　　 通過免疫組織化學(xué)觀察研究，結(jié)合半定量分析技術(shù)，檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、Smad4在各組大鼠肺血管中表達(dá)情況；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法（RT-PCR）檢測VEGFmRNA、TGF-β1mRNA、S

10、mad4 mRNA在肺組織中的表達(dá)水平。進(jìn)一步從免疫組化及分子生物學(xué)層面探討肺心病肺動脈高壓的部分發(fā)病機制及肺心舒的部分藥效機制。
　　 結(jié)論：
　　 1腹腔一次性注射野百合堿（60mg/kg）成功復(fù)制肺心病肺動脈高壓模型，并模擬肺血管重塑的病理改變。模型大鼠內(nèi)源性內(nèi)皮素-1（ET-1）表達(dá)增加、一氧化氮（NO）表達(dá)減少并與肺動脈血壓增高和右心肥厚并存。VEGF、TGF-β1及Smad4參與了MCT誘導(dǎo)大鼠肺心病肺動脈高

11、壓的發(fā)生與發(fā)展，并且VEGF和TGF-β1、Smad4相互作用參與了肺動脈高壓及肺血管重塑，TGF-β1促進(jìn)VEGF的表達(dá)，且受Smad4的調(diào)控。
　　 2肺心舒對MCT誘導(dǎo)肺心病肺動脈高壓大鼠有一定預(yù)防保護(hù)作用。其可能的作用機制與降低大鼠血漿ET-1，增加NO表達(dá)，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，減少細(xì)胞外基質(zhì)中轉(zhuǎn)化生長因子β的生成，從而防止肺血管重構(gòu)，改善肺血流動力學(xué)狀態(tài)，改善右心功能有關(guān)；可能通過對VEGF和TGF-β1的表達(dá)及其Sma