肝動脈化延遲對移植肝影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分肝移植動脈化延遲模型的建立及初步研究 目的：建立簡單的大鼠自體肝移植動脈化延遲模型,并初步研究動脈化延遲對移植肝的影響。 方法： 1.動物模型的建立。采用經(jīng)腹主動脈灌注法對肝臟進(jìn)行冷灌注,之后夾閉肝總動脈,切斷胃十二指腸動脈并開放其起始部。門靜脈復(fù)流結(jié)束無肝期,肝總動脈血管夾精確控制(肝動脈復(fù)流)肝動脈化延遲時間。 2.研究動脈化延遲對移植肝影響。采用TUNEL法檢測冷灌注后和肝動脈化延遲(1小時

2、)兩個時間段肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：共做實(shí)驗(yàn)56例次,手術(shù)成功率98％(55/56)。冷灌注后光鏡下顯示肝臟灌注良好,未見紅細(xì)胞殘留。門靜脈復(fù)流后見胃十二指腸動脈開口處有少量血液返流,光鏡下見小葉間動脈充滿紅細(xì)胞。TUNEL法顯示肝動脈化延遲1小時的凋亡肝細(xì)胞及凋亡膽管細(xì)胞較冷灌注完畢時明顯升高(P<0.05),分別為64.00±14.17,1.14±1.31(個/視野)和123.50±38.20,6.52±3.42(

3、個/視野)。 結(jié)論：本模型是研究肝動脈化延遲對移植肝影響較為理想的模型。肝動脈化延遲1小時,移植肝凋亡的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞均明顯升高,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增多的原因可能為肝動脈缺血時間延長和門靜脈血返流、淤積于肝動脈,但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。 第二部分肝動脈第二次灌注對動脈化延遲供肝的保護(hù)作用 目的：了解肝動脈第二次灌注利多卡因、肝素、阿拓莫蘭和生理鹽水混合液對動脈化延遲供肝的保護(hù)作用,為尋找預(yù)防或減少動脈化延遲對移植

4、肝影響的方法奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動物分組和標(biāo)本采集：健康、成年、SPF級純系SD大鼠36只,隨機(jī)分成4組,A組為假手術(shù)組；B組為門靜脈、肝動脈同時開放組；C組為肝動脈化延遲組；D組為肝動脈第二次灌注組。B、C、D組在門靜脈開放1小時后留取標(biāo)本。 2.觀察指標(biāo)：標(biāo)本行病理形態(tài)學(xué)檢查及TUNEL細(xì)胞凋亡檢測。3.所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,用SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間比較采用重復(fù)測量

5、數(shù)據(jù)的方差分析(SNK)。 結(jié)果： 1.病理變化:A組無明顯病理改變。C組改變最明顯,D組次之,B組較輕。 2.凋亡情況:A組有少量的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞凋亡,與B、C、D組比較均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冷灌注后后凋亡肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞明顯增多,B、C、D組中,B組細(xì)胞凋亡最少,C組最多,D組居中,C組與D組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與D組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：經(jīng)肝動脈第二次灌注利多卡因、肝素、阿拓莫蘭和生理鹽水