TGF-β受體抑制劑Compound C對hESC向RPE定向誘導(dǎo)效率的影響.pdf

1、分類號：R77密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團專業(yè)學(xué)位口。學(xué)校代碼：10062學(xué)號：2011602588學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又肄鼉斜六號碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSER，I!ATIoN論文題目：TGFP受體抑制劑CompoundC對hESC向RPE定向誘導(dǎo)效率的影響TITLEEffectsofTGFPreceptorinhibitorCompoundCondirecteddifferentiationofhumanembryonicstem

2、cellsintetinalpigmentepithelialcells一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：眼科學(xué)論文作者：楊博宇指導(dǎo)教師：李筱榮教授導(dǎo)師組成員：楊春波研究員天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文’中文摘要研究目的應(yīng)用人胚胎干細(xì)胞(HumanEmbryonicStemCells，hESC)來源的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RetinalPigmentEpithelium，RPE)進(jìn)行體內(nèi)細(xì)胞移植治療，為視網(wǎng)膜變性疾病

3、患者重見光明帶來了希望。然而hESC向RPE細(xì)胞誘導(dǎo)分化效率低、成熟周期長、造價高仍然是目前研究的瓶頸。RPE由神經(jīng)外胚層發(fā)育而來，促進(jìn)hESC向神經(jīng)外胚層分化，可以提高RPE定向誘導(dǎo)效率。文獻(xiàn)報道，轉(zhuǎn)化生長因子p(TGFp)超家族受體抑制劑CompoundC能提高1lESC向神經(jīng)方向誘導(dǎo)分化效率，抑制llESC向內(nèi)胚層、中胚層及滋養(yǎng)外胚層分化。本研究通過在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)體系qb力1]ACompoundC，觀察其對RPE誘導(dǎo)效率的影響，并

4、對hESC來源的RPE(11ESCRPE)細(xì)胞特性進(jìn)行體外驗證，為將來hESC來源的RPE移植治療視網(wǎng)膜變性疾病提供基礎(chǔ)。方法將H1hESC分為對照組和CompoundC處理組。對照組在細(xì)胞過度融合后，以去除堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的血清替代物(KOSR)培養(yǎng)體系誘導(dǎo)RPE定向分化；CompoundC處理組于誘導(dǎo)分化前6d在培養(yǎng)體系中加入luMCompoundC。在誘導(dǎo)分化第1、3、5周，采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(I

5、mPCR)檢測兩組人類配對盒基因(PAX6)、小眼球相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(ⅦTF)、細(xì)胞視黃醛結(jié)合蛋白(C凡地BP)、RPE65mRNA的表達(dá)。將hESCRPE細(xì)胞分離純化，采用RTPCR、蛋白免疫印跡法(Westernblot)、細(xì)胞免疫熒光法和吞噬實驗對純化的hESCRPE細(xì)胞進(jìn)行體外鑒定。結(jié)果1、在誘導(dǎo)分化第4周，CompoundC處理組肉眼可見黑色素團塊出現(xiàn)，而對照組無色素團塊出現(xiàn)。誘導(dǎo)分化第5周，CompoundC處理組可見多個色素細(xì)