吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌耐藥性及粘金黃桿菌耐藥機制的研究.pdf

1、目的:首先探討產(chǎn)吲哚黃桿菌(簡稱吲哚黃桿菌)和粘金黃桿菌β-內(nèi)酰胺酶的檢出情況，主要包括超廣譜β-內(nèi)酰胺酶和金屬β-內(nèi)酰胺酶；其次是探討β-內(nèi)酰胺酶陰性菌株和陽性菌株耐藥性的區(qū)別；再次，探討吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌多重耐藥的機制；最后，研究粘金黃桿菌對亞胺培南耐藥的機制，主要包括β-內(nèi)酰胺酶的作用，外膜蛋白的作用和外排機制的作用，并指導(dǎo)臨床合理用藥。 方法:收集了本院的25株吲哚黃桿菌和10株粘金黃桿菌。首先用瓊脂稀釋法測定15種

2、藥物的最小抑菌濃度；其次用三維試驗測定超廣譜β-內(nèi)酰胺酶和金屬β-內(nèi)酰胺酶，并使用三對引物擴增特異性基因;最后，按照NCCLS的方法，分析了β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株和陰性菌株耐藥性的差異。 臨床粘金黃桿菌676和592對亞胺培南敏感(MIC≤4ug/ml)，使用它做誘導(dǎo)試驗。經(jīng)過在含有亞胺培南濃度遞增的培養(yǎng)基上連續(xù)傳代后，得到了兩株對亞胺培南耐藥的菌株，命名為676imp-r和592imp-r。然后按照測定四株細(xì)菌的MIC和β-內(nèi)酰

3、胺酶情況。 用離心的方法收集外膜蛋白，聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法分析比較外膜條帶的差異。 用CCCP和利血平抑制的方法驗證泵出機制，CCCP為0.5ug/ml，利血平為10ug/ml。在抑制劑存在的條件下，亞胺培南的MIC下降為原來的1/4時表明存在泵出機制。 結(jié)果: 1.25株吲哚黃桿菌中，金屬酶β-內(nèi)酰胺酶的檢出率為72.0％(18/25)；10株粘金黃桿菌，金屬酶的檢出率為90％(9/10)。所有菌株

4、中，都沒有檢出超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。PCR擴增試驗表明，IND基因的檢出率為20％(5/25)，CGB基因的檢出百分率為30％(3/10)，CGA的檢出率為0。 2.吲哚黃桿菌對IMP，AMC，CTX，CRO，CFP，CAZ，ATM和FEP的耐藥率都超過了50％；TZP，TIM，SCF，LEV和CIP的耐藥率分別為18.5％，33.3％，8.3％，27.8％和33.3％。IMP，AMC，TIM，CTX，SCF，CRO，CAZ，AT

5、M和FEP對粘金黃桿菌的耐藥率都超過了50％，TZP，CFP，LEV和CIP的耐藥率分別為46.8％，30.0％，44.1％，44.2％。 3.吲哚黃桿菌金屬酶陽性菌株和金屬酶陰性菌株耐藥相比較，IMP，TZP，AMC，TIM，CTX，CRO，CFP，CAZ有顯著性差異，P＜0.05，說明這些藥物的耐藥與金屬酶的關(guān)系密切；而ATM，F(xiàn)EP，LEV和CIP沒有顯著性差異，說明吲哚黃桿菌對這些藥物的耐藥與金屬酶關(guān)系不大。 4

6、.連續(xù)傳代40次后，獲得了2株耐藥株：676ipm-r和592imp-r，對亞胺培南的MIC均為64ug/ml。原始菌株和誘導(dǎo)菌株對TZP，AMC，TIM，CTX，SCF，CRO，CFP，CAZ，F(xiàn)OX，AZT，LEV，VA，F(xiàn)EP和CIP的耐藥譜沒有明顯變化。 5.四株細(xì)菌都檢測到CGB基因；在12.0％的分離膠中，誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后的菌株電泳條帶看不出明顯的差異；CCCP和利血平存在的條件下，相關(guān)菌株的MIC變化很小，沒有下降到

7、原來的1/4。 結(jié)論： 1.吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌ESBLs的檢出率很底，而金屬酶的檢出率很高。 2.吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌對碳青霉烯類，青霉素類和部分頭孢類耐藥。而喹諾酮類(LEV，CIP)和含有β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的哌拉西林可以做為治療吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌感染的首選藥。 3.金屬β-內(nèi)酰胺酶可能是造成吲哚黃桿菌和粘金黃桿菌多重耐藥的主要原因。 4.沒有證據(jù)證明泵出機制和外膜蛋白在粘金黃桿菌對亞