野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓對Jagged2-Notch3信號的影響及辛伐他汀的干預效應.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓對肺血管Jagged2/Notch3信號分子表達的影響
　　目的:
　　觀察野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓對肺血管Jagged2/Notch3信號分子表達的影響。
　　方法:
　　1.將45只Sprague-Dawley(SD)大鼠按隨機分組法分為正常對照組（C組）、溶劑對照組（S組）和野百合堿組（M組），每組15只，利用一次性腹腔注射野

2、百合堿50mg/kg建立肺動脈高壓模型，溶劑對照組注射相同劑量的溶媒，正常對照組不做處理。
　　2.4周時，通過右心導管術，測定平均肺動脈壓(mPAP)和右心室收縮壓(RVSP)分析肺血流動力學變化。并通過病理學觀察肺血管重構，計算右心肥厚指數(RHVI)和中膜厚度百分比(MT％)，分析肺動脈高壓嚴重程度。
　　3.待血流動力學檢測完畢，利用栓塞法處死大鼠，打開胸腔，分離出大鼠肺動脈及其上緣的部分中動脈和肺葉，利用免疫組織化

3、學法分析三組肺血管Jagged2/Notch3/Hes5蛋白表達的變化;采用實時熒光定量PCR方法檢測三組肺血管壁Jagged2/Notch3/Hes5 mRNA表達的變化。統(tǒng)計學分析模型組中Jagged2/Notch3 mRNA與mPAP的相關性。
　　4.所有實驗數據以均數±標準差(mean±SD)表示，利用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。各組間比較采用單因素方差分析，相關性采用Pearson線性相關法分析。
　

4、　結果:
　　1.與正常對照和溶劑對照組相比較，4周時HE染色發(fā)現野百合堿組的血管壁顯著增厚，中膜厚度百分比(MT％)顯著增加(MT％:0.71±0.04 vs0.38±0.05和0.37±0.05，Mn=12，Sn=13，Cn=14，P＜0.05);此外野百合堿組的mPAP、RVSP和RVHI均顯著高于正常對照和溶劑對照組(mPAP:29.92±5.03 mmHg vs16.82±2.17 mmHg和17.20±1.97mmHg

5、; RVSP:56.09±18.89 mmHg vs25.47±1.56 mmHg和25.69±1.94 mmHg; RVHI:0.42±0.04 vs0.21±0.01和0.21±0.02; Mn=12，Sn=13，Cn=14，P＜0.05)。正常組和溶劑組之間差異無顯著性意義(P＞0.05）。
　　2.免疫組織化學結果表明Jagged2主要表達于肺小動脈內膜的內皮細胞，Notch3、Hes5主要表達于肺小動脈中層的平滑肌細胞。

6、與溶劑對照組以及正常對照組相比較，野百合堿組肺小動脈的Jagged2、Notch3和Hes5表達均顯著增高(Notch3:1.7080±0.1330 vs0.9915±0.0378和0.9982±0.0007;Jagged2:10.2700±0.2543 vs0.9917±0.0160和0.9982±0.0007; Hes5:1.8030±0.2783 vs0.9825±0.0160和0.9982±0.0007;Mn=12,Sn=13,

7、Cn=14，P＜0.05)。正常組和溶劑組之間差異無顯著性意義（P＞0.05）。
　　3.Notch3 mRNA和mPAP存在正相關(r=0.587，p=0.045，p＜0.05); Jagged2 mRNA和mPAP相關性無統(tǒng)計學差異（r=-0.353，p=0.260，p＞0.05）。
　　結論:
　　利用野百合堿單次腹腔注射，4周時成功誘導肺血管重構和肺動脈高壓，并且肺血管Jagged2/Notch3/Hes5信號

8、分子的表達均明顯升高，Notch3 mRNA和肺血流動力學之間存在正相關，而Jagged2 mRNA和肺血流動力學之間相關性無統(tǒng)計學差異。
　　第二部分 辛伐他汀干預野百合堿誘導肺動脈高壓大鼠肺血管重構與Jagged2/Notch3信號的關系
　　目的:
　　探討辛伐他汀干預野百合堿誘導肺動脈高壓大鼠肺血管重構與Jagged2/Notch3信號的關系
　　方法:
　　1.24只Sprague-Dawley(

9、SD)大鼠給予一次性腹腔注射野百合堿50mg/kg建立肺動脈高壓病理模型。3周后，按隨機分組法分為他汀組(simvastatin，S組，n=12)和對照組(placebo，P組，n=12)，他汀組給予辛伐他汀(2mg/kg/day)灌胃2周，對照組給予同等劑量的溶劑生理鹽水灌胃2周。
　　2.辛伐他汀灌胃2周后，待血流動力學監(jiān)測完畢，利用栓塞法處死大鼠，打開胸腔，分離出大鼠肺動脈及其上緣的部分中動脈和肺葉組織，參照前面方法行HE染

10、色，病理形態(tài)學分析各組肺血管重構的變化;并分別通過免疫熒光雙標技術、蛋白免疫印跡技術(Westem Blotting)和RT-PCR技術檢測各組肺血管Jagged2/Notch3表達的變化;
　　3.所有實驗數據以均數±標準差(mean±SD)表示，利用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。2組間均數比較采用獨立樣本T檢驗，相關性采用Pearson線性相關法分析。
　　結果:
　　1.辛伐他汀灌胃2周后，他汀組mPA

11、P、RVSP、RVHI、MT％等指標均較對照組明顯降低(mPAP:31.55±3.63 mmHg vs21.11±3.09 mmHg; RVSP:56.09±18.89 mmHg vs30.06±3.08 mmHg; RVHI:0.45±0.09 vs0.34±0.04; MT％:0.72±0.13 vs0.51±0.05; Cn=12,Sn=12,P＜0.05)。
　　2.利用免疫熒光雙標技術、蛋白印跡技術和實時熒光定量PCR技

12、術分析各組蛋白和RNA表達量后發(fā)現，Jagged2主要表達于肺小動脈內膜的內皮細胞，Notch3主要表達于肺小動脈中層的平滑肌細胞，他汀組Notch3蛋白和mRNA表達較對照組顯著降低，而Jagged2蛋白和mRNA表達較對照組顯著升高。他汀組和對照組結果分別為(Notch3:0.4331±0.0074 vs0.5165±0.0061; Jagged2:0.6160±0.0070 vs0.4355±0.0140;Notch3mRNA:1