三氧化二砷和肼苯噠嗪體外逆轉(zhuǎn)ERα表達作用效果的比較.pdf

1、背景和目的 從20世紀70年代起，原為乳腺癌低發(fā)區(qū)的亞洲國家發(fā)病率逐年升高，在我國特別是在北京、上海等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)，乳腺癌已有成為威脅女性健康首要惡性腫瘤。在乳腺癌中雌激素受體(ER)常作為一個重要分子標志物用于評估激素依賴性、預測內(nèi)分泌治療的效果。根據(jù)ER表型差異，將乳腺癌分為ER陽性乳腺癌和ER陰性乳腺癌。大約2/3乳腺癌患者表達ER，腫瘤細胞生長具有雌激素依賴性。臨床上對于ER陽性乳腺癌患者，常采取雌激素撤除的內(nèi)分泌治療，

2、其療效等同于化療。 ER失表達的機理不甚清楚，研究發(fā)現(xiàn)，ER陰性乳腺癌ER基因表達沉默與基因重排、突變、缺失等無關，可能與其啟動子區(qū)CpG島異常甲基化有關。目前已被證實有去甲基化作用的藥物主要有5-雜氮-2-脫氧胞嘧啶，三氧化二砷，肼苯噠嗪等。 選取了兩種國產(chǎn)藥物。三氧化二砷是一種傳統(tǒng)的抗腫瘤中藥，目前已用于臨床的血液腫瘤的治療。同時它也具有使去除ER陰性乳腺癌ER基因啟動子區(qū)CpG島異常甲基化作用。肼苯噠嗪是一種抗高血

3、壓藥物，由于其產(chǎn)生的副反應較重，臨床上應用很少，主要用于妊娠時的高血壓病。 本實驗探討三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時，誘導MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞株雌激素受體重新表達作用的比較。 材料與方法 1、選用雌激素受體(ER)陰性人乳腺癌細胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435常規(guī)培養(yǎng)。將對數(shù)生長期的MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞調(diào)整細胞濃度為5×10<

4、'5>/ml，分別換含As<,2>O<,3>的L-15培養(yǎng)液，至As<,2>O<,3>終濃度為2.0μmol/L，換含肼苯噠嗪的L-15培養(yǎng)液，至肼苯噠嗪終濃度為10μmol/L，連續(xù)培養(yǎng)72h。以不加藥同期培養(yǎng)的MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞作為陰性對照。 2、采用RT-PCR技術(shù)檢測兩種藥物處理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞ERa基因mRNA表達情況。并用imagcj軟件分析兩種藥物去甲基化作用的

5、強弱。 3、采用免疫組織化學技術(shù)檢測經(jīng)兩種藥物處理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞ERa蛋白的表達情況。 4、實驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，采用方差分析，以a=0.05為差異顯著性標準。 結(jié)果 1、免疫組化法檢測經(jīng)三氧化二砷和肼苯噠嗪處理的MDA-MB-231細胞漿上均可見ERa蛋白的表達，陽性率(％)：三氧化二砷為52.04±2.38，肼苯噠嗪為51.07±1.43。兩組數(shù)據(jù)

6、比較差別無統(tǒng)計意義(P>0.05)。MDA-MB-435細胞漿上均可見ERa蛋白的表達，陽性率(％)：三氧化二砷為55.15±6.56，肼苯噠嗪為54.11±5.36。兩組數(shù)據(jù)比較差別無統(tǒng)計意義(P>0.05)。 2、MDA-MB-231、MDA-MB-435細胞株雌激素受體在三氧化二砷和肼苯噠嗪誘導作用中無明顯差異(P>0.05)。 3、RT-PCR法檢測經(jīng)三氧化二砷和肼苯噠嗪處理的MDA-MB-231和MDA-MB-

7、435細胞均能擴增出ERa基因，結(jié)果用imagej軟件進行分析顯示兩種藥物的去甲基化作用沒有明顯的差異。 結(jié)論 1、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時，誘導MDA-MB-231細胞株雌激素受體重新表達作用無明顯差異。 2、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時，誘導MDA-MB-435細胞株雌激素受體重新表達作用無明顯差異。 3、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物作用效果