Myocardin在低氧誘導(dǎo)肺血管內(nèi)皮向平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用.pdf

1、目的：1.觀察低氧條件下肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(PAECs)向平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化； 2.利用RNA干擾技術(shù)阻斷myocardin基因的表達(dá)，研究myocardin在PAECs向平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化中的作用； 3.探討sildenafil在PAECs向平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化中作用和其可能機(jī)制。 方法：本實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)豬肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，經(jīng)免疫磁珠法(用血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子PECAM-1做免疫分選標(biāo)記)純化；構(gòu)建psimyoc

2、ardinRNA表達(dá)載體抑制myocardin基因的表達(dá)。純化的PAECs分組為： 常氧組(N):置于含21％O2，5％CO2，74％N2的CO2培養(yǎng)箱中； 低氧組(N)：置于含1％O2，5％CO2，94％N2的低氧培養(yǎng)箱中； 常氧+psimyocardinRNA抑制組(N+pSi)； 低氧+psimyocardinRNA抑制組(H+pSi)； (以上各組分別培養(yǎng)1d，4d，7d) 常氧+

3、sildenafil20μg/ml組(N+S)； 低氧+sildenafil20μg/ml組(H+S)； (此兩組分別培養(yǎng)1d和7d)。 用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)myocardinmRNA的表達(dá)；免疫熒光檢測(cè)平滑肌特異性標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SM-actin)的表達(dá)，結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。 結(jié)果：1.免疫熒光檢測(cè)PAECs中α-SM-actin陽(yáng)性率在低氧4d組

4、(0.96‰±0.08)明顯低于低氧7d組(2.07‰±0.06)(P＜0.05)，陽(yáng)性細(xì)胞呈梭形或多角形，而常氧組和低氧1d組均未見(jiàn)α-SM-actin的陽(yáng)性表達(dá)； 2.RT-PCR顯示myocardinmRNA的表達(dá)在低氧4d組(0.14±0.01)明顯低于低氧7d組(0.23±0.03)(P＜0.05)，常氧組和低氧1d組均未檢測(cè)出其表達(dá)。 3.RNAi沉默myocardin基因表達(dá)后，其mRNA水平明顯低于對(duì)應(yīng)的

5、低氧4d組(0.03±0.02)和低氧7d組(0.05±0.01)(P＜0.05)；平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化率也明顯降低(0.19‰±0.07；0.21‰±0.04；P＜0.05)。 4.用sildenafil處理后，平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化率明顯低于對(duì)應(yīng)低氧7d組(1.02‰±0.05；P＜0.05)；MyocardinmRNA水平明顯也明顯低于對(duì)應(yīng)低氧7d組(0.09±0.02)(P＜0.05)。 結(jié)論：由此我們認(rèn)為PAEC