姜黃素通過調(diào)節(jié)NGAL基因表達(dá)對(duì)乳腺癌MDA-MB-23細(xì)胞侵襲能力的影響.pdf

1、目的:通過研究姜黃素對(duì)侵襲相關(guān)因子中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)表達(dá)的調(diào)控，初步探討姜黃素在防治乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中可能存在的新作用機(jī)制。
　　 方法:以高侵襲性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231為研究對(duì)象，采用不同劑量姜黃素處理并使用NF-κB特異性抑制劑Bay-117082（20μmol/L）對(duì)比觀察。MTT法檢測(cè)姜黃素對(duì)細(xì)胞的毒性作用，Transwell Matrigel法觀察細(xì)胞的侵襲能力，黏附實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的黏附

2、能力，Western blot檢測(cè)細(xì)胞中NGAL、MMP-9、IκBα及P-IκBα蛋白的表達(dá)水平，RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中NGAL、MMP-9 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，明膠酶譜法檢測(cè)細(xì)胞中MMP-9活性的變化。
　　 結(jié)果:姜黃素對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制呈時(shí)間和劑量依耐性。但當(dāng)作用時(shí)間≤24h，劑量≤15μM時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著姜黃素濃度的增加細(xì)胞降解Matrigel及隨后穿膜能力

3、和黏附能力逐漸降低，以15μM姜黃素作用效果最強(qiáng)，與NF-κB特異性抑制劑Bay-117082作用相似。Western blot結(jié)果顯示，姜黃素對(duì)NGAL、MMP-9、P-IκBα蛋白表達(dá)的抑制作用呈劑量依賴性，且15μM姜黃素作用效果與NF-κB特異性抑制劑Bay-117082相似;但姜黃素及Bay-117082對(duì)IκBα的蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。RT-PCR結(jié)果顯示姜黃素顯著抑制NGAL及MMP-9 mRNA表達(dá)，其抑制作用呈濃度依賴性