HBcAg展示技術表達含有礁珊瑚熒光蛋白的病毒樣顆粒.pdf

1、乙肝核心抗原（HBcAg）具有天然形成病毒樣顆粒的能力，同時這種結構能使機體產生特異性的體液免疫和細胞免疫作用，故成為了良好的免疫載體蛋白。本實驗用含有231 個氨基酸的大分子礁珊瑚熒光蛋白（ZsGreen）作為的目標抗原，以具備顆粒裝配區(qū)的乙肝核心抗原蛋白為抗原遞呈的載體，通過基因克隆技術將表達ZsGreen 蛋白的基因插入HBcAg 中位于顆粒表面的主要免疫優(yōu)勢抗原決定簇c/e1表位區(qū)，并將這部分融合基因與載體pET28a 進行連接

2、，構建重組表達載體。重組表達載體轉化至大腸桿菌BL21（DE3），經過對表達條件及發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化后，重組融合蛋白（Zscore）在大腸桿菌中的表達量達到20％以上。表達菌體經過破璧，離心澄清，硫酸銨沉淀，陽離子及分子篩層析等方法的分離純化，最終獲得顆粒純度大于80％的重組融合蛋白。重組融合蛋白經過系統(tǒng)的結構分析及免疫學研究，證實：（1）HBcAg 在融合大分子蛋白ZsGreen 后其產物仍能形成病毒樣顆粒（VLP）的結構，（2）且展