HBcAg展示技術(shù)表達(dá)含有礁珊瑚熒光蛋白的病毒樣顆粒.pdf

1、乙肝核心抗原（HBcAg）具有天然形成病毒樣顆粒的能力，同時(shí)這種結(jié)構(gòu)能使機(jī)體產(chǎn)生特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫作用，故成為了良好的免疫載體蛋白。本實(shí)驗(yàn)用含有231 個(gè)氨基酸的大分子礁珊瑚熒光蛋白（ZsGreen）作為的目標(biāo)抗原，以具備顆粒裝配區(qū)的乙肝核心抗原蛋白為抗原遞呈的載體，通過基因克隆技術(shù)將表達(dá)ZsGreen 蛋白的基因插入HBcAg 中位于顆粒表面的主要免疫優(yōu)勢(shì)抗原決定簇c/e1表位區(qū)，并將這部分融合基因與載體pET28a 進(jìn)行連接

2、，構(gòu)建重組表達(dá)載體。重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)過對(duì)表達(dá)條件及發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化后，重組融合蛋白（Zscore）在大腸桿菌中的表達(dá)量達(dá)到20％以上。表達(dá)菌體經(jīng)過破璧，離心澄清，硫酸銨沉淀，陽離子及分子篩層析等方法的分離純化，最終獲得顆粒純度大于80％的重組融合蛋白。重組融合蛋白經(jīng)過系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)分析及免疫學(xué)研究，證實(shí)：（1）HBcAg 在融合大分子蛋白ZsGreen 后其產(chǎn)物仍能形成病毒樣顆粒（VLP）的結(jié)構(gòu)，（2）且展