Aurora激酶抑制劑對(duì)耐維甲酸急性早幼粒細(xì)胞白血病作用的體外研究.pdf

1、背景：Aurora激酶的主要作用是在細(xì)胞周期中確保染色體的精確組裝，在細(xì)胞分裂過程中維持基因的完整性。VX-680是Aurora激酶的一種小分子抑制劑，干擾有絲分裂的進(jìn)程及雙極紡錘體的形成。本文的研究目的是探討VX-680能否在體外作為一個(gè)有潛力的抑制劑靶向抑制耐維甲酸(ATRA)的急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)。
　　 方法：流式細(xì)胞儀檢測(cè)ATRA處理72h后的APL細(xì)胞株NB4(ATRA敏感株)及NB4-R2(ATRA耐藥株

2、)表面髓系分化標(biāo)志CD11b的表達(dá)來評(píng)價(jià)ATRA對(duì)NB4及NB4-R2細(xì)胞的分化作用；免疫熒光染色分析VX-680處理的NB4-R2細(xì)胞單極紡錘體的形成；四甲基偶氮唑比色法(MTT實(shí)驗(yàn))評(píng)價(jià)VX-680對(duì)NB4-R2細(xì)胞增殖的抑制作用；亞二倍體凋亡峰(SubG1)分析法及Annexin V/PI染色法檢測(cè)VX-680對(duì)NB4-R2細(xì)胞的凋亡促進(jìn)作用；Hoechst33342染色鑒別VX-680處理的NB4-R2細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化；蛋白質(zhì)

3、免疫印跡法(Western blot)測(cè)定VX-680處理的NB4-R2細(xì)胞中Aurora-A的活性的改變及凋亡相關(guān)信號(hào)途徑蛋白(Akt-1，caspase-3，PARP)的表達(dá)；JC-1熒光探針檢測(cè)VX-680處理的NB4-R2細(xì)胞線粒體膜電位變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.ATRA體外能夠誘導(dǎo)NB4細(xì)胞的分化，但不能誘導(dǎo)NB-R2細(xì)胞分化。
　　 2.VX-680體外能抑制NB4-R2細(xì)胞增殖。3.VX-68

4、0可通過降低Aurora-A激酶磷酸化活性位點(diǎn)Thr288的自我磷酸化抑制Aurora-A激酶的活性，以及誘導(dǎo)耐維甲酸細(xì)胞株NB4-R2細(xì)胞產(chǎn)生單極紡錘體來抑制NB4-R2細(xì)胞增殖。4.亞二倍體凋亡峰(SubG1)檢測(cè)法、Annexin V/PI染色法及Hoechst33342染色法均能證實(shí)VX-680通過凋亡途徑抑制NB4-R2細(xì)胞增殖。5.JC-1熒光探針法及蛋白質(zhì)免疫印跡法證實(shí)VX-680可通過促進(jìn)NB4-R2細(xì)胞線粒體膜去極化，