豬乳鐵蛋白基因克隆、表達及其產(chǎn)物對斷奶仔豬生長、免疫和抗菌肽基因表達影響的研究.pdf

1、本研究運用RT-PCR技術(shù),從泌乳母豬乳腺組織中克隆了豬乳鐵蛋白(PLF)基因,采用桿狀病毒-昆蟲表達系統(tǒng)在家蠶蛹中表達了重組豬乳鐵蛋白(rPLF),研究了表達產(chǎn)物rPLF的體外抗菌效果、rPLF對斷奶仔豬生長性能、免疫功能、腸道菌群和小腸形態(tài)以及抗菌肽基因表達的影響.主要研究結(jié)果如下:1.采用RT-PCR技術(shù),先從泌乳15天的大約克母豬乳腺組織中分兩片段克隆出PLF的基因,然后再通過兩片段拼接的方法克隆出全長PLF基因.2.構(gòu)建了PL

2、F基因的重組病毒轉(zhuǎn)移載體pBlueBacHisC-PLF,通過同源重組的方法構(gòu)建了PLF基因重組桿狀病毒,在Sf9細(xì)胞中繁殖,并感染家蠶蛹;SDS-PAGE檢測結(jié)果表明,蠶蛹細(xì)胞裂解產(chǎn)物中有一分子量為80kD左右的特異性條帶,進一步進行western blot檢測,在特異性條帶對應(yīng)位置也有相應(yīng)條帶,且特異性條帶的分子量也在80kD左右,結(jié)果顯示,PLF基因在家蠶蛹內(nèi)得到了表達.3.通過Time-kill方法,研究了含rPLF蠶蛹和經(jīng)胃蛋

3、白酶水解的含rPLF蠶蛹的體外1、2、4、8、16和24小時的抗菌效果.4.通過90頭28日齡斷奶的平均體重在6.13kg左右杜長嘉仔豬(公母各半)30天的飼養(yǎng)試驗,結(jié)果表明,飼糧中添加rPLF比對照組(不添加rPLF)腹瀉率降低了24.85﹪(P<0.01),日增重提高了34.04(P<0.01),料重比降低了12.83﹪(P<0.05);通過90頭28日齡斷奶的平均體重在7.05kg左右的杜長大仔豬(公母各半)斷奶后1-15天(斷奶

4、前期)和16-30天(斷奶后期)的分階段飼養(yǎng)試驗,結(jié)果表明,在斷奶前期,飼糧中添加rPLF比對照組腹瀉率降低了66.25﹪(P<0.01),日增重提高了41.84﹪(P<0.01),料重比降低了14.78﹪(P<0.05);在斷奶后1-30天,飼糧中添加rPLF比對照組腹瀉率降低了75.20﹪(P<0.01),日增重提高了15.19﹪(P>0.05),料重比降低了12.74﹪(P>0.05);從本研究結(jié)果揭示,rPLF有較好的抗斷奶仔豬

5、腹瀉效果,在提高日增重和降低料重比的效果上,在斷奶前別的效果優(yōu)于斷奶后期.5.杜長嘉斷奶仔豬飼養(yǎng)30天后,各處理組取3頭體重相近小母豬進行屠宰,取血樣分離血清,進行T-淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗、免疫球蛋白測定、及IL-1和IL-2以及血清鐵和總鐵結(jié)合力的分析.6.杜長大斷奶仔豬飼養(yǎng)第15天后,各處理組取3頭體重相近的小母豬進行屠宰,取結(jié)腸內(nèi)容物,進行腸道菌群分析,取十二指腸和空腸,制電鏡切片,觀察小腸絨毛隱窩的變化.7.杜長大斷奶仔豬在飼養(yǎng)第1