ELISA方法檢測(cè)棉花黃萎菌的研究.pdf

1、棉花黃萎病是一種危害嚴(yán)重的世界性病害，目前已遍布世界30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，已成為嚴(yán)重影響世界各主產(chǎn)棉國(guó)棉花高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的主要障礙。為了控制棉花黃萎病，減少其帶來的經(jīng)濟(jì)損失，建立對(duì)其方便快捷、切實(shí)有效的檢測(cè)方法，本實(shí)驗(yàn)室利用棉花黃萎菌的菌絲蛋白作為抗原免疫家兔，制備了該病原菌的多克隆抗體，通過對(duì)3只不同家兔個(gè)體免疫產(chǎn)生的抗體進(jìn)行篩選，選擇出效價(jià)最高的抗體，測(cè)定其特異性，并以此抗體進(jìn)行了抗體、羊抗兔抗體在間接ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中最適反應(yīng)濃度的篩選

2、，并最終確定以抗體工作濃度1：2000，羊抗兔抗體工作濃度1：500建立特異性檢測(cè)棉花黃萎病菌的間接ELISA方法，該方法檢測(cè)靈敏度達(dá)到5ng/mL棉花黃萎菌菌絲蛋白。
　　 本實(shí)驗(yàn)所制備的多克隆抗體經(jīng)過Protein-A柱純化，特異性較好，效價(jià)可達(dá)1：64000。將此多克隆抗體進(jìn)行生物素標(biāo)記，并進(jìn)行了初步的雙抗夾心ELISA實(shí)驗(yàn)。
　　 應(yīng)用間接ELISA方法檢測(cè)棉花組織及其根部土壤中棉花黃萎菌的含量，發(fā)現(xiàn)病株的莖、根