磁刺激誘導(dǎo)下HMGB1對(duì)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移影響的體外研究.pdf

1、目的:
　　高遷移率族蛋白B1（High-mobility group box1，HMGB1）是廣泛表達(dá)于真核細(xì)胞內(nèi)高度保守的一種非組氨酸核蛋白，參與基因的表達(dá)和核小體的定位。HMGB1參與了CNS疾病的發(fā)生發(fā)展，在腦卒中和脊髓損傷早期可作為炎癥因子加重神經(jīng)炎癥反應(yīng)，后期則可促進(jìn)神經(jīng)血管的再生有利于神經(jīng)功能的恢復(fù)。在胚胎發(fā)育時(shí)期，HMGB1參與神經(jīng)元突觸的生長(zhǎng)及細(xì)胞的遷移。CNS損傷后，激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞也可分泌HMGB1，但其對(duì)

2、星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移能力的影響還不清楚。前期的研究表明磁刺激能激活并調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步研究MS誘導(dǎo)下HMGB1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.星形膠質(zhì)細(xì)胞的提取、培養(yǎng)及鑒定:提取出生后為2-3天SD(Sprague-Dawley)大鼠大腦皮質(zhì)組織，分離培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，并觀察其生長(zhǎng)及形態(tài)，并用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察GFAP蛋白的表達(dá)，鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度。
　　2.

3、實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)不同頻率的磁刺激將實(shí)驗(yàn)分為3組:①對(duì)照組;②低頻磁刺激組(1HZ);③高頻磁刺激組(10HZ)。觀察細(xì)胞遷移能力，并運(yùn)用Western Blot觀察ERK1/2磷酸化及HMGB1表達(dá)情況。
　　3.干擾HMGB1表達(dá)后細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)分組:①控制組（磁刺激）;②Si-RNA組（磁刺激+HMGB1 Si-RNA）。觀察細(xì)胞遷移能力，并運(yùn)用Western Blot檢測(cè)干擾效果。
　　4.U0126阻滯后細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)分組

4、:①控制組（磁刺激）;②實(shí)驗(yàn)組（磁刺激+U0126）。觀察細(xì)胞遷移能力，并運(yùn)用Western Blot觀察ERK1/2磷酸化及HMGB1表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.取培養(yǎng)的第3代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，用GFAP熒光染色鑒定，星形膠質(zhì)細(xì)胞純度＞95％。
　　2.高頻磁刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。且ERK1/2磷酸化及HMGB1的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組和低頻磁刺激組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義（P＜0.01）。
　　3.HMGB1 Si-RNA干擾后，HMGB1表達(dá)水平顯著下降，且星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力相應(yīng)明顯下降，與控制組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.U0126阻滯后，HMGB1表達(dá)水平顯著降低，且星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力相應(yīng)明顯下降，與控制組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.高頻磁(10HZ)刺激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，并可促進(jìn)ERK1/2的磷酸化。