BMP4誘導(dǎo)人骨膜來源細(xì)胞成軟骨分化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討B(tài)MP4在體外培養(yǎng)誘導(dǎo)人骨膜來源細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化中的作用。
　　方法：
　　以小腿截肢患者脛骨骨膜組織為材料，采用組織塊法分離骨膜來源細(xì)胞，置于含10％胎牛血清的DMEM/F12完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)，流式細(xì)胞技術(shù)分析第3代骨膜來源細(xì)胞表面抗原(CD90和CD105)表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)分為對照組，軟骨誘導(dǎo)液組和BMP4組，分別加入完全培養(yǎng)基，軟骨誘導(dǎo)液和含BMP4軟骨誘導(dǎo)液進(jìn)行培養(yǎng)

2、，14-21天后采用甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測細(xì)胞的蛋白多糖和Ⅱ型膠原著色情況；定量PCR檢測Aggrecan、Ⅱ型膠原和SOX9mRNA的表達(dá)情況。臺(tái)盤藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測第3代、第9代骨膜來源細(xì)胞增殖情況及BMP4對骨膜來源細(xì)胞增殖的影響，并繪制細(xì)胞生長曲線圖。
　　結(jié)果：
　　1、骨膜來源細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，細(xì)胞生長曲線證實(shí)骨膜來源細(xì)胞具有良好的增殖能力，第3代及第9代細(xì)胞增殖能力相似。<

3、br>　　2、流式細(xì)胞儀檢測證實(shí)細(xì)胞表面抗原CD90及CD105呈陽性表達(dá)。
　　3、組織化學(xué)及免疫組化染色檢測證實(shí)成軟骨誘導(dǎo)分化后細(xì)胞蛋白聚糖及Ⅱ型膠原呈陽性表達(dá)，細(xì)胞具有向軟骨細(xì)胞分化的能力。
　　4、甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測證實(shí)BMP4組及軟骨誘導(dǎo)液組蛋白聚糖及Ⅱ型膠原呈陽性表達(dá)，而對照組呈陰性表達(dá)。
　　5、定量PCR檢測顯示骨膜來源細(xì)胞經(jīng)BMP4誘導(dǎo)后aggrecan、Ⅱ型膠原、SOX9mRNA

4、的表達(dá)明顯高于軟骨誘導(dǎo)液及對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　6、臺(tái)盤藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測證實(shí)BMP4可以影響骨膜來源細(xì)胞增殖。
　　結(jié)論：
　　1、體外培養(yǎng)的骨膜來源細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，具有向軟骨細(xì)胞分化的能力。
　　2、BMP4一定濃度下影響骨膜來源細(xì)胞增殖。
　　3、BMP4具有促進(jìn)骨膜來源細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的功能。
　　4、BMP4促進(jìn)骨膜來源細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化與Smads信號(hào)通路密切相