RNA編輯酶ADAR1對小鼠淋巴細胞增殖能力以及基因表達譜的影響.pdf

1、RNA編輯（RNA editing）是DNA轉(zhuǎn)錄成RNA后, RNA編輯酶（RNA editing enzyme）對前體mRNA中的核苷酸進行刪除、添加或重新修飾的過程。它改變了基因的序列以及遺傳信息,從而產(chǎn)生廣泛的生理效應(yīng)。RNA編輯酶以脫氨方式使得RNA特異位點的腺嘌呤脫氨轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤,或者是特異位點的胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?而次黃嘌呤在堿基配對時被識別為鳥嘌呤。這些替換使得原有遺傳密碼或者剪切位點發(fā)生轉(zhuǎn)變,從而使其編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功

2、能發(fā)生改變。ADAR1 (RNA依賴性腺嘌呤脫氨酶,adenosine deaminase acting on RNA)是研究最為廣泛的一種RNA編輯酶。研究顯示淋巴細胞增殖時ADAR1 表達顯著升高，而降低ADAR1 表達后淋巴細胞殺傷功能顯著降低。提示ADAR1 可能通過調(diào)控細胞功能進而影響排斥反應(yīng)的發(fā)生。本研究旨在探索細胞水平排斥反應(yīng)即經(jīng)典的雙向混合淋巴細胞培養(yǎng)試驗中，降低ADAR1 表達對淋巴細胞增殖能力以及其他基因表達的影響。

3、因此，本研究分為兩部分,探索ADAR1 對小鼠淋巴細胞增殖能力的影響以及對小鼠淋巴細胞基因表達譜的影響。 試驗第一部分: 目的: 探索ADAR1 對小鼠淋巴細胞增殖功能的影響。 方法: ADAR1 特異性siRNA 轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細胞，觀察細胞增殖的變化；通過RT-PCR 檢測細胞中ADAR1 mRNA 的變化；細胞計數(shù)、臺盼蘭拒染法和四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測降低ADAR1 表達后對小鼠淋巴細胞增殖的影響

4、。 結(jié)果: 抑制ADAR1 表達24h 后實驗組存活淋巴細胞數(shù)量顯著減少（P﹤0.01），而死亡細胞數(shù)量顯著增多（P﹤0.01），且MTT 結(jié)果與之相符（P﹤0.01）。ADAR1 mRNA表達受到明顯抑制；對照組ADAR1 表達沒有明顯變化，淋巴細胞受到抗原刺激而活化、增殖能力沒有明顯變化。說明ADAR1 的表達與淋巴細胞接受抗原刺激后活化及增殖能力密切相關(guān)。 結(jié)論：降低淋巴細胞ADAR1 表達后，淋巴細胞受到抗原刺激

5、而活化、增殖能力減弱，提示淋巴細胞增殖功能可能受到了抑制，而ADAR1 可能發(fā)揮了重要作用。 試驗第二部分: 目的: 探索抑制ADAR1 表達后小鼠淋巴細胞基因表達譜變化情況。 方法: ADAR1 特異性siRNA 轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細胞。采用DNA 微陣列技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24h 時小鼠淋巴細胞表達譜變化。 結(jié)果:抑制淋巴細胞內(nèi)ADAR1 表達后，在mRNA 水平上，393 個基因表達發(fā)生了變化，表達上調(diào)超過兩

6、倍的基因數(shù)目為78 個，下調(diào)超過2 倍的基因數(shù)目為315 個。表達下調(diào)基因包括細胞周期調(diào)控基因（例如CDC20、CDC14b 等）以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因（例如IRF1、JAK1 以及一系列嗅覺感受器受體基因等），說明ADAR1 的表達與淋巴細胞功能相關(guān)基因的表達關(guān)系密切。 結(jié)論：降低ADAR1 表達后可引起小鼠淋巴細胞一系列基因表達的變化，其中包括一系列與細胞功能密切相關(guān)的基因，提示ADAR1 可能通過調(diào)控其他基因進而影響淋巴細胞的各