尤文肉瘤EWS-FLI1基因原核表達質粒的構建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、南昌大學醫(yī)學院碩士學位論文尤文肉瘤EWSFLI1基因原核表達質粒的構建及鑒定姓名：陳文昭申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：黃山虎20100601Objective：AbstractABSTRACTToconstructEwing’SsarcomaEWS—FLI1geneprokaryoticexpressionvectorMethods：。ThetargetgeneofEWSFLI1wasobtainedbyRTPCRmethod

2、afterthetotalRNAwasextractedfromEwing’SsarcomaA673cellsThesitesequencesofrestrictiveendonucleaseSacIandHind111wereintroducedintotheupstreamanddownstreamoftargetgenerespectivelyThetargetgenefragmentwereclonedintopMD18Tand

3、transformedintoEColiJM109ScreenedpositiveclonesWereconfirmedbyPC&restrictiveendonucleasedigestionandDNAsequencingTheEWSFLI1genewassequentiallysubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE30，andtherecombinantplasmidpQE30EWS

4、FLI1wasconfirmedbyrestrictiveendonucleasedigestionandDNAsequencingTheproteins，expressedinEcoliJM109transformedwithEWS—FLI1recombinantplasmidunderIPTGinduction，werecharacterizedbySDS—PAGEandWesternblotResult：PCRresultindi

5、catedthatanamplifiedDNAfragmentWasinsizeof15kbRestrictiveendonucleasedigestionanalysisindicatedthatthetargetgeneWasinsizeof15kbDNAsequencinganalysisdemonstratedthatsequenceoftargetgeneaccordedwithanticipatedoneTheEWSFLI1

6、withamolecularweightof54kDaWaShii曲iyexpressedinpQE30EWSFLI!WesternblotprovedthatthemolecularmassofexpressedproductaccordedwiththeoneofEWSFLllConclusion：TherecombinantprokaryoticexpressionvectorpQE30EWSFLI1Wasconstructeds

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