15-PGDH介導(dǎo)PGE-,2-在人乳腺癌細(xì)胞多藥耐藥中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:本課題旨在探討15-羥前列腺素脫氫酶(15-PGDH)是否參與人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥過(guò)程,并結(jié)合上游基因COX-2和這兩個(gè)基因共同調(diào)控的產(chǎn)物PGEz,以及耐藥相關(guān)基因P-gp、BCRP表達(dá)變化探討15-PGDH在多藥耐藥中的作用及可能機(jī)制；進(jìn)一步以15-PGDH誘導(dǎo)藥物對(duì)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),觀察其是否具有耐藥逆轉(zhuǎn)作用,以明確15-PGDH能否作為腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)的新靶點(diǎn)。
　　 方法:以人乳腺癌敏感細(xì)胞株MCF

2、-7及阿霉素耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR為研究對(duì)象,加不同濃度ADM維持耐藥,觀察細(xì)胞形態(tài)并用MTT法檢測(cè)細(xì)胞耐藥指數(shù)；應(yīng)用RT-PCR、ELISA、Westernblot技術(shù),觀察兩種細(xì)胞中15-PGDH、COX-2表達(dá)及細(xì)胞上清液中PGE2含量變化。MTT法和Hochest33258染色分別觀察15-PGDH誘導(dǎo)藥物(吲哚美辛、布洛芬、吡格列酮、地塞米松)對(duì)MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞增殖和凋亡的影響,并用MTT法檢測(cè)15-P

3、GDH誘導(dǎo)藥物對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞ADM、Taxol的耐藥逆轉(zhuǎn)作用；RT-PCR分析四種藥物對(duì)兩種細(xì)胞中15-PGDH、COX-2及耐藥相關(guān)基因P-gp、BCRP mRNA表達(dá)的影響,Western blot觀察四種藥物對(duì)兩種細(xì)胞中15-PGDH、COX-2蛋白表達(dá)的影響,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中PGE2含量變化。
　　 結(jié)果:(1)ADM維持MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥后,細(xì)胞輪廓變清晰,胞漿黑色顆粒、空泡增多,細(xì)胞耐藥

4、程度增加,耐藥指數(shù)由23.26增至46.21。(2)MCF-7/ADR細(xì)胞中15-PGDH mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯低于MCF-7細(xì)胞,而COX-2 mRNA和蛋白表達(dá)高于MCF-7細(xì)胞；細(xì)胞上清液中PGE2含量明顯高于后者。(3)四種15-PGDH誘導(dǎo)藥物對(duì)兩種細(xì)胞均有不同程度的增殖抑制作用,呈劑量依賴效應(yīng)；四種藥物在低毒劑量濃度(吲哚美辛100μmol/L、布洛芬200μmol/L、吡格列酮20μmol/L、地塞米松100 nmo

5、l/L)均有不同程度的耐藥逆轉(zhuǎn)作用,對(duì)ADM逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.90、2.01、1.87、1.61,對(duì)Taxol逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.67、2.0、1.28、1.03；四種15-PGDH誘導(dǎo)藥物勻可增加ADM和Taxol對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。(4)吲哚美辛和布洛芬能引起兩種細(xì)胞中15-PGDH mRNA表達(dá)增高和COX-2 mRNA表達(dá)明顯降低；吡格列酮對(duì)MCF-7細(xì)胞中15-PGDH、COX-2 mRNA表達(dá)影響不明顯,但

6、能增加MCF-7/ADR細(xì)胞中15-PGDH mRNA表達(dá),并降低COX-2 mRNA表達(dá)；地塞米松不引起MCF-7細(xì)胞中15-PGDH mRNA表達(dá)變化,但能增加MCF-7/ADR細(xì)胞中15-PGDH mRNA表達(dá),且能降低兩種細(xì)胞中COX-2 mRNA表達(dá)。(5)四種15-PGDH誘導(dǎo)藥物均能增加MCF-7/ADR細(xì)胞中15-PGDH蛋白表達(dá),但在MCF-7細(xì)胞中布洛芬可降低15-PGDH蛋白表達(dá),其余藥物對(duì)15-PGDH蛋白表達(dá)影

7、響不明顯；吲哚美辛、布洛芬、吡格列酮均可降低兩種細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá),而地塞米松僅能降低MCF-7細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá),不引起MCF-7/ADR細(xì)胞中COX-2蛋白表達(dá)變化；(6)四種15-PGDH誘導(dǎo)藥物均能降低兩種細(xì)胞上清液中PGE2含量,不同誘導(dǎo)藥物組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(7)MCF-7/ADR細(xì)胞中P-gp mRNA表達(dá)水平較MCF-7高,BCRP mRNA表達(dá)無(wú)明顯差異；除吡格列酮外,其余藥物均能降低MCF-7細(xì)胞中P

8、-gp mRNA表達(dá),在MCF-7/ADR細(xì)胞中僅地塞米松具有降低P-gp mRNA表達(dá)的作用；吡格列酮、地塞米松能使MCF-7/ADR細(xì)胞中BCRP mRNA表達(dá)降低,其余藥物對(duì)兩種細(xì)胞中BCRP mRNA表達(dá)無(wú)影響。
　　 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)(1)15-PGDH與COX-2一樣通過(guò)介導(dǎo)PGE2參與人乳腺癌MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥過(guò)程的調(diào)節(jié)；(2)15-PGDH誘導(dǎo)藥物(吲哚美辛、布洛芬、吡格列酮、地塞米松)對(duì)MCF-7、