大腸癌同源性細(xì)胞株轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的篩選及初步分析.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大腸癌同源性細(xì)胞株轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的篩選及初步分析姓名：曲利娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)指導(dǎo)教師：丁彥青余英豪20070320中文摘要：大腸癌同源性細(xì)胞株轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的篩選及初步分析可靠的指標(biāo)，本課題利用2DE聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜(MALDITOFMS)技術(shù)對一對人大腸癌不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組分析和鑒定。方法本研究采用一對國內(nèi)外通用、來自同一親本、遺傳背景一致的人大腸癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株

2、SW620和低轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株SW480為實(shí)驗(yàn)對象。首先，利用2DE技術(shù)分離比較SW620和SW480細(xì)胞株2DE差異表達(dá)蛋白質(zhì)圖譜：通過Powerlookl100透射掃描儀獲取2DE凝膠銀染圖像，利用MelanieIII對圖像進(jìn)行背景消減、斑點(diǎn)檢測、重復(fù)性及相關(guān)性比較等分析，選取二者差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，作為最終質(zhì)譜鑒定的對象。其次，利用MALDITOFMS對兩種細(xì)胞株的差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，獲得各蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋譜(PMF)；

3、通過Mascot和ProFound軟件查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫，篩選并初步鑒定出與大腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)。而后，把SW480細(xì)胞株篩選出的特異表達(dá)蛋白質(zhì)鈣依賴磷脂結(jié)合蛋白I(AnnexinI)作為靶蛋白，利用細(xì)胞免疫組化和Western免疫印跡驗(yàn)證AnnexinI蛋白在兩種細(xì)胞株的表達(dá)情況。最后，利用核酸原位雜交和免疫組化方法，分別從mRNA和蛋白水平上檢測AnnexinI在大腸正常黏膜、大腸癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)情況，闡述該基因和蛋白

4、與大腸癌浸潤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，并探討其臨床意義。結(jié)果1Sw620和SW480細(xì)胞株2DE差異表達(dá)蛋白質(zhì)圖譜的結(jié)果分析MelanielII軟件分析3次相同條件下SW620和SW480細(xì)胞株2DE圖譜，結(jié)果顯示重復(fù)性、匹配性較好。SW620檢測到(131662)個蛋白質(zhì)點(diǎn)，平均匹配率82％；SW480檢測到(133274)個蛋白質(zhì)點(diǎn)，平均匹配率80％。蛋白質(zhì)點(diǎn)pI和Mr分布廣泛，以p14～7、Mr20～70kDa范圍內(nèi)分布最多。兩種細(xì)胞株蛋白質(zhì)