TRIM59對(duì)樹突細(xì)胞的調(diào)控作用.pdf

1、背景:Trim59基因位于小鼠的三號(hào)染色體上，開放閱讀框長(zhǎng)度為1209個(gè)堿基，可編碼403個(gè)氨基酸的蛋白。作為一種抗原呈遞細(xì)胞，樹突細(xì)胞在先天性免疫和獲得性免疫中都發(fā)揮著十分重要的作用。Trim59蛋白具有典型的RBCC結(jié)構(gòu)域，在細(xì)胞內(nèi)成簇狀分布，在多種不同的組織中均有表達(dá)，而在骨髓細(xì)胞中的表達(dá)量極高，暗示TRIM59在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中具有重要作用。
　　目的:確定Trim59對(duì)樹突細(xì)胞的調(diào)控作用。
　　方法:向Raw264

2、.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染慢病毒建立穩(wěn)定細(xì)胞系，RT-PCR檢測(cè)沉默效率;流式染色分析不同細(xì)胞系表面共刺激分子來檢測(cè)Trim59基因?qū)渫患?xì)胞的調(diào)控作用，并用Realtime PCR定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)各種炎癥因子及其相關(guān)蛋白的相對(duì)釋放量;Western-blot法分析細(xì)胞內(nèi)NF-κb信號(hào)通路中各種蛋白的表達(dá)量。為了進(jìn)一步探討Trim59基因在炎癥中的作用，我們構(gòu)建基因敲除鼠，GM-CSF誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞得到小鼠的樹突細(xì)胞，并用流式細(xì)胞染色法檢測(cè)不同基因型樹

3、突細(xì)胞表面的共刺激分子和分化標(biāo)記分子如CD11c，CD40，CD80等;同時(shí)我們對(duì)野生鼠和雜合鼠進(jìn)行為期兩年的觀察，分析不同基因型小鼠腎臟、脾臟及腸道的炎癥情況。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染了SiRNA的穩(wěn)定細(xì)胞系內(nèi)Trim59基因的沉默效率為約75％，沉默效率很高。轉(zhuǎn)染不同慢病毒的細(xì)胞系的細(xì)胞核形態(tài)無明顯差異，細(xì)胞均無明顯凋亡;Trim59基因沉默后許多與NF-κb相關(guān)的細(xì)胞表面蛋白分子的表達(dá)量升高，促炎因子因子的釋放量增高，細(xì)胞內(nèi)NF-κ

4、b信號(hào)強(qiáng)度升高。在樹突細(xì)胞中我們也能得到同樣的現(xiàn)象。與野生鼠相比，雜合鼠樹突細(xì)胞表面的NF-κb相關(guān)蛋白分子表達(dá)量升高。野生鼠與敲除鼠的生活狀況、壽命等無明顯差異;經(jīng)過兩年的觀察后，雜合鼠結(jié)腸、脾臟、腎臟等器官的炎癥程度高于野生鼠。
　　結(jié)論:Trim59基因?qū)渫患?xì)胞具有調(diào)控作用，并在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。該基因沉默后Raw264.7以及樹突細(xì)胞內(nèi)NF-κb的信號(hào)通路明顯增強(qiáng)，說明Trim59對(duì)細(xì)胞內(nèi)的NF-κb信號(hào)通路具有