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1、 本研究擬進行sTNFR1的基因克隆,進一步觀察sTNFR1基因及其產(chǎn)物治療肝功能衰竭的效果,為臨床上治療肝功能衰竭提供新的線索?! ”狙芯坎捎肦T-PCR成功地擴增出sTNFR1全編碼區(qū)基因片段,并將其克隆于原核表達質(zhì)粒pMAL-c2x,構(gòu)建了原核表達重組質(zhì)粒的基因工程菌pMAL-c2x-sTNFR1/JM109,成功表達了融合蛋白sTNFR1-MBP,并經(jīng)Westernblot鑒定;經(jīng)淀粉樹脂親和層析法純化法得到了純化的融合
2、蛋白sTNFR1-MBP;將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(PSR/NIH3T3)治療GalN/LPS所致的小鼠急性肝衰竭,提高小鼠存活率(70﹪,14/20),能減輕肝臟病變程度,降低血清中轉(zhuǎn)氨酶及IL-1,IL-6等細(xì)胞因子的水平,減低肝細(xì)胞的凋亡率?! 〗Y(jié)論為TNFα對瞬時轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701細(xì)胞株細(xì)胞毒性作用受到抑制,凋亡率較對照組降低;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(PSR/NIH3T3)能分泌sTNFR1,中和TNFα
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