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文檔簡介
1、對乙型肝炎病毒(HBV)野生株及核殼蛋白變異株L97和V60在HepG<,2>細胞HLA-I表面表達的特性及其調(diào)節(jié)機制進行初步探討,試圖認識病毒及其變異與宿主細胞相互作用和影響.構(gòu)建HBV基因組野生株和核殼蛋白變異株穩(wěn)定表達載體,提供實驗研究的基礎材料.通過定點突變技術將1.2拷貝HBV(adr亞型)野生株質(zhì)粒p3.8Ⅱ構(gòu)建成核殼蛋白變異株L97和V60質(zhì)粒,經(jīng)序列測定證實nt2189A→C和nt2078C→G.3株質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG<,
2、2>細胞DNA的Southern blot雜交均顯示明顯的3.8kb雜交帶,培養(yǎng)上清均測定出HBV抗原,表明具有生物活性,分別亞克隆入EB病毒表達載體EBO-plpp使能穩(wěn)定表達.重組載體EBO-WT、EBO-L97和EBO-V60作限制性內(nèi)切酶酶切鑒定及再次測序確定點突變.測定HBV野生株和變異株L97、V60誘導HepG<,2>細胞膜HLA-I/抗原肽復合物表達的強度,探討各株在宿主細胞HLA-I表面表達的特性及核殼蛋白熱點變異對H
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