HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的實驗研究及相關(guān)機制探討.pdf

1、病理性瘢痕是人類皮膚創(chuàng)傷后后組織修復(fù)過程中的必然產(chǎn)物，其機制尚不完全清楚，一般認為皮膚的遷延愈合，修復(fù)細胞中成纖維細胞的大量增殖與凋亡抑制，細胞外基質(zhì)中膠原合成與降解失衡所引起。因此，加速皮膚創(chuàng)傷愈合，抑制成纖維細胞的過度增殖和促進細胞外基質(zhì)中大量膠原的降解是治療病理性瘢痕的基本原則。肝細胞生長因子(Hepatocyte grOWth factor，HGF)是一種多功能的生理性細胞因子，能加速表皮和內(nèi)皮細胞的遷移運動和分裂增殖；并能抑制

2、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factorβ1，TGFβ1)的活性，促進多種基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生。為此，開展了HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的動物實驗及其相關(guān)機理的研究。目的是評價HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的療效，為HGF防治病理性瘢痕提供實驗依據(jù)；并探討其相關(guān)機理，為HGF促進創(chuàng)傷愈合、治療病理性瘢痕提供理論基礎(chǔ)。 首先制作兔耳腹側(cè)增生性瘢痕模型，局部注射攜帶人HGF基因的質(zhì)粒pUDKH后，通過

3、大體觀察、肥大指數(shù)測量、組織病理學(xué)觀察、天狼猩紅染色、細胞凋亡情況及α-SMA的表達幾方面，評價HGF在治療病理性瘢痕方面的療效。大體觀察可見局部注射pUDKH 15d后，皮膚創(chuàng)口瘢痕組織變平、顏色變暗，而對照組創(chuàng)口依然保持增生性瘢痕組織特性，紅腫且高出周邊正常皮膚。pUDKH組的肥大指數(shù)最小(1.61±0.25)，而兩對照組分別為2.29±0.2和2.30±0.11。組織病理學(xué)觀察可見pUDKH組表皮分化較好，接近正常皮膚厚度，細胞排

4、列成典型復(fù)層鱗狀上皮并伴有角化形成；對照組表皮細胞分化相對差，細胞層相對較厚。而且對照組真皮層纖維組織明顯較pUDKH組厚，且纖維束粗大，排列紊亂。同時對組織進行天狼猩紅染色，偏振光顯微鏡下觀察到對照組創(chuàng)口存在較豐富而粗大的Ⅰ型膠原。這就表明HGF有減少創(chuàng)口組織中膠原形成的作用。羥脯氨酸在膠原蛋白中含量恒定，可直接反映皮膚組織中膠原蛋白含量。通過對皮膚中羥脯氨酸含量的檢測，顯示pUDKH組單位皮膚組織內(nèi)的羥脯氨酸含量較對照組明顯減少(p

5、uDKH組為1.08±0.11μg/ml皮膚濕重，對照組分別為1.50±0.27和1.47±0.17μg/ml皮膚濕重)。運用TUNEL檢測了pUDKH組和對照組兔耳瘢痕組織中細胞凋亡情況，結(jié)果顯示pUDKH組明顯比對照組細胞凋亡數(shù)目多。這就說明HGF可能通過促進肌成纖維細胞凋亡的途徑來達到治療病理性瘢痕的目的。同時免疫組化染色結(jié)果提示，在pUDKH組隨著瘢痕的成熟α-SMA的表達逐漸下降，說明肌成纖維細胞在不斷退縮，符合生理性反應(yīng)。但