磷酸二酯酶V抑制劑對肺高壓大鼠肺動脈內(nèi)皮舒張功能及肺血管重塑作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究的目的是建立肺動脈高壓大鼠的模型，并且以此為基礎(chǔ)，從肺動脈高壓大鼠的肺血管內(nèi)皮舒張功能改變和肺血管重塑兩個過程觀察磷酸二酯酶v抑制劑(西地那非sildenafil)對肺動脈高壓大鼠的作用，并探討其可能的機(jī)制。 方法：1)經(jīng)頸總動脈和頸靜脈端一端吻合建立SD大鼠左向右動靜脈分流肺循環(huán)血流增加的肺動脈高壓模型；另外，建立經(jīng)腹腔注射野百合堿60mg．kg'l造成大鼠肺高壓的模型。2)24只SD大鼠隨機(jī)分為3組(每組8只)：對照組

2、(c組)即偽手術(shù)組：手術(shù)6周組(06組)和手術(shù)10周組(010組)，如上方法制作肺循環(huán)血流增加肺高壓模型，術(shù)后06組飼養(yǎng)6周，Olo組飼養(yǎng)10周。至觀察終點(diǎn)，測各組頸總動脈壓(mSAP)、肺動脈平均壓(mPAP)，右心房血?dú)猓倚氖曳屎裰笖?shù)，并取肺組織RT-PCR法檢測preproET-1mRNA和eNOSmRNA表達(dá)含量變化。3)另取SD大鼠40只做磷酸二酯酶V抑制劑作用的研究；隨機(jī)分為偽手術(shù)組(C組)和手術(shù)組(O組)，C組偽手術(shù)后做

3、為對照，O組制作頸部動靜脈分流動物模型；兩組大鼠同條件下飼養(yǎng)10周后，再隨機(jī)分為四個亞組(每組10只)：C組分為空白對照組(C+P組)、陰性對照組(C+S組)；0組分為西地那非組(O+S組)和安慰劑組(O+P組)。監(jiān)測mSAP、mPAP、右心房血?dú)夂陀倚氖曳屎裰笖?shù)；隨后C+S組和O+S組經(jīng)頸靜脈注入鹽酸西地那非(sildenafil)25mg／kg，C+P組和O+P組經(jīng)頸靜脈注入相同容量的生理鹽水。在體實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取各組肺動脈段，測游離

4、肺動脈環(huán)對乙酰膽堿濃度(Ach)反應(yīng)曲線和對硝酸甘油1μM舒張功能，C+S組和O+S組測Ach濃度反應(yīng)曲線時預(yù)加sildenafil。觀察肺循環(huán)血流增加的肺動脈高壓模型中肺動脈血管舒張功能改變及sildenafil對其作用。4)40只SD大鼠，隨機(jī)分為4組(每組n=lO)：C組(對照組)、P組(安慰劑組)和Sl組和s2組。C組僅腹腔注射生理鹽水一次；P組、S1組和S2組腹腔注射野百合堿60mg．kg-1后14天分別做如下處理：S1組腹腔

5、注射sildenafil25mg．kg-ld-I，S2組腹腔注射sildenafil50mg．kg-ld-1，P組腹腔注射生理鹽水1m1．d-1(等體積與sildenafil50mg．kg-1)；各組大鼠同條件飼養(yǎng)6周到觀察終點(diǎn)，測mPAP和右心室肥厚指數(shù)(RV／LV+S)，麻醉處死動物取肺組織做病理切片，觀察肺小血管HE染色的病理改變，計算肺小血管管壁與管腔比值，同時將切片做a-actin免疫熒光染色，判斷肺小血管肌化程度；并檢測各組

6、肺組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA以及總ERK1／ERK2蛋白、磷酸化ERK1／ERK2蛋白和MKPl蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：1)頸部動．靜脈分流后復(fù)制了肺循環(huán)血流增加的肺高壓模型，表現(xiàn)為經(jīng)胸心臟彩超顯示肺動脈血流峰值前移；且mPAP升高和右心室肥厚指數(shù)升高；腹腔注射野百合堿60mg．kg'l亦成功造成肺高壓模型，表現(xiàn)為mPAP、RV／LV+S的升高；病理表現(xiàn)為直徑<200gm的肺小動脈管壁與管腔比明顯增加；同時肺動脈a-a

7、ctin免疫熒光染色增強(qiáng)。2)利用頸部左向右分流肺循環(huán)血流模型的06組和Oto組與C組相比，06組和010組preproET-1mRNA表達(dá)量逐漸增高(P值分別<0．05和0．01)，但06組和Olo組組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義；而eNOSmRNA表達(dá)量在各組無明顯差異。3)利用頸部左向右分流肺循環(huán)血流模型O+P組與O+S組兩組與C+P組與C+S組相比mPAP升高，但是O+S組比O+P組mPAP顯著下降：O組兩個亞組與C組兩亞組間的游離肺動脈

8、環(huán)對Ach和硝酸甘油舒張最大舒張百分比減少；但O+S組和O+P組相比，對Ach和硝酸甘油舒張最大舒張百分比明顯增加(P<0．01)；肺動脈環(huán)對Ach濃度反應(yīng)曲線可見到C+P組與C+S組無明顯差異，各濃度下O+S組舒張百分比較O+P組增加，O+S組舒張功能改善，O+P組舒張百分比最小，與各組比都有差異(P<0．01)。4)腹腔注射野百合堿的P組、S1組和S2組均發(fā)展為肺動脈高壓，但S1組和S2組程度比P組輕，表現(xiàn)為mPAP、RV／LV+S

9、和病理切片<200~m的肺小動脈管壁與管腔比明顯降低(P<0．05或P<0．01)；S1組和S2組肺動脈a-actin免疫熒光染色較P組減弱；VEGFmRNA表達(dá)在P組升高，但與P組比S1組和S2組有降低，磷酸化ERK,／ERK2蛋白P組升高，與P組比S1組和S2組有降低，MKPl蛋白表達(dá)P組升高，在S1組和S2組則繼續(xù)增加。 結(jié)論：1)大鼠經(jīng)頸部左向右分流肺循環(huán)血流模型成功得模擬了臨床中左向右分流肺高壓病例的血流動力學(xué)改變；腹

10、腔注射野百合堿成功模擬肺高壓模型，并模擬了肺血管重塑的病理改變。2)肺循環(huán)血流增加后內(nèi)源性內(nèi)皮素一1(ET～1)和一氧化氮(NO)發(fā)生改變，這是造成肺高壓的原因之一，preproET-1mRNA表達(dá)增加與肺動脈血壓增高和右心肥厚并存。3)磷酸二酯酶V(PDE5)抑制劑sildenafil可降低動靜脈分流肺高壓動物模型的肺動脈平均壓，同時部分恢復(fù)了肺血管的內(nèi)皮依賴性血管舒張的損傷。4)sildenafil可降低野百合堿誘發(fā)肺高壓大鼠模型的