磷酸二酯酶2抑制劑逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的認(rèn)知功能障礙.pdf

1、目的:探討磷酸二酯酶2(PDE2)抑制劑BAY60-7550對慢性不可預(yù)知性應(yīng)激誘導(dǎo)的認(rèn)知功能改變。
　　 方法:
　　 1.建立模型:雄性ICR小鼠連續(xù)14天腹腔給予PDE2抑制劑BAY60-7550，每天給藥后30 min進(jìn)行慢性不可預(yù)知性應(yīng)激（2次/天）。
　　 2.行為學(xué)實(shí)驗(yàn):以Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和新奇目標(biāo)/位置識別實(shí)驗(yàn)，觀察藥物對慢性不可預(yù)知性應(yīng)激誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損傷的改善作用。
　　 3.神

2、經(jīng)可塑性變化:采用高爾基染色法觀察慢性應(yīng)激和藥物對小鼠海馬CA1區(qū)域神經(jīng)元形態(tài)（樹突支點(diǎn)及長度）的影響。
　　 4.突觸相關(guān)蛋白變化:酶聯(lián)免疫印跡法(western blot)檢測神經(jīng)可塑性相關(guān)突觸蛋白的表達(dá)改變——磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（p-ERK），磷酸化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（pCREB），CREB共激活因子(TORC1)，磷酸化Ets域蛋白(pElk)，即刻早期反應(yīng)因子1（Egr-1）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)

3、。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)實(shí)驗(yàn):
　　 a.Morris水迷宮結(jié)果表明慢性不可預(yù)知性應(yīng)激后小鼠學(xué)習(xí)記憶明顯損傷。從訓(xùn)練環(huán)節(jié)的第二輪至第六輪，和正常小鼠相比，慢性應(yīng)激小鼠需要更長的時(shí)間找到平臺，而給予BAY60-7550則能明顯改善這一變化，并且這種作用可被事先給予NOS前體（L-Arginine），CaMKⅡ抑制劑（mry-AIP），NMDA(MK-801)和蛋白激酶G(KT5823)受體拮抗劑所拮抗。訓(xùn)

4、練1h或24h后測試時(shí)，應(yīng)激組小鼠在原平臺所在象限的穿越次數(shù)和停留時(shí)間比正常組明顯減少，說明慢性應(yīng)激小鼠的空間記憶能力（包括長期記憶和短期記憶）受到損傷，而這種改變能被BAY60-7550逆轉(zhuǎn)，此作用同樣可被L-Arginine、mry-AIP、MK-801、KT5823阻斷，而蛋白激酶A(PKA)拮抗劑H89作用不明顯。
　　 b.在新奇目標(biāo)識別實(shí)驗(yàn)和目標(biāo)位置識別實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)激組對新奇事物和事物新位置的變化的辨別能力明顯比正常組

5、下降，并且這種影響可持續(xù)到訓(xùn)練后24h，說明慢性不可預(yù)知性應(yīng)激可損傷短期記憶和長期記憶。和Morris水迷宮類似，BAY60-7550能改善這種現(xiàn)象，而L-Arginine、mry-AIP、MK-801、KT5823均能阻斷這種改善作用，H89在一定程度上能部分拮抗BAY60-7550的作用，并且這種作用在24h時(shí)比較明顯。
　　 2.高爾基染色結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激后小鼠海馬神經(jīng)元尖端和基底的樹突分支點(diǎn)變少和樹突長度變短，BAY6

6、0-7550對這一狀況的改善可被L-Arginine、mry-AIP、MK-801、KT5823所阻斷，H89作用微弱。
　　 3.為了進(jìn)一步研究其機(jī)制，采用western blot檢測與神經(jīng)可塑性相關(guān)的突觸蛋白及學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)蛋白分子的表達(dá)。結(jié)果顯示應(yīng)激可導(dǎo)致ERK蛋白的增加，轉(zhuǎn)入因子（Elk，CREB及其輔激活蛋白TORC1）及突觸蛋白（Egr-1）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的減少，而BAY60-7550對此的改善作用可被L-A

7、rginine、mry-AIP、MK-801、KT5823阻斷，H89可阻斷BAY60-7550對CREB，TORC1及BDNF的增加作用，暗示Bay60-7550對記憶改善作用可能是通過NMDAR/CaMKⅡ-nNOS-cGMP通路實(shí)現(xiàn)。
　　 結(jié)論:BAY60-7550主要通過NMDAR/CaMKⅡ-nNOS-cGMP通路最終激活cGMP，阻止ERK信號的傳遞，增加突觸相關(guān)蛋白和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子實(shí)現(xiàn)對慢性應(yīng)激誘導(dǎo)記憶損傷的