siRNA抑制人卵巢癌SW626細胞CXCR4基因的研究.pdf

1、目的：研究應用RNA干擾技術(shù)沉默人卵巢癌SW626細胞趨化因子受體4（CXCR4）基因后，卵巢癌細胞CXCR4的蛋白表達情況，對卵巢癌細胞增殖活性的影響，推斷其與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、治療及預后的關(guān)系。
　　 方法：根據(jù)CXCR4基因編碼序列及RNAi寡核苷酸設(shè)計原則，設(shè)計合成兩對針對CXCR4基因的siRNA片段和1對FAM標記的陰性對照siRNA片段，序列經(jīng)BLAST查詢，確定為CXCR4特異性序列，排除與其他基因同源性。實驗分

2、為四個組：空白對照組、陰性對照組、實驗S1組和實驗S2組。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染至卵巢癌SW626細胞中，熒光顯微鏡觀察檢測轉(zhuǎn)染效率，采用Western blot檢測RNA干擾后卵巢癌SW626細胞CXCR4蛋白的表達情況。利用四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞增殖的情況。
　　 結(jié)果：1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染卵巢癌SW626細胞48小時后，熒光顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)當卵巢癌細胞處對數(shù)生長期，培養(yǎng)24h后融合度為90％時進行轉(zhuǎn)染

3、，質(zhì)粒和脂質(zhì)體比例為1：3時轉(zhuǎn)染效率最高，發(fā)綠色熒光的細胞數(shù)可達到70％以上。
　　 2、轉(zhuǎn)染48小時后，用western blot法檢測，①實驗S1組和S2組與空白對照組和陰性對照組比較，卵巢癌SW626細胞CXCR4/β-actin蛋白表達水平降低，蛋白表達明顯受抑制（P<0.05）。②陰性對照組和空白對照組比較：CXCR4/β-actin蛋白表達無顯著性差異（P>0.05）。③實驗組S1組和S2組比較：無顯著性差異（P>0

4、.05）。
　　 3、轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后，MTT法檢測細胞增殖情況，結(jié)果顯示：①實驗S1組和S2組與空白對照組和陰性對照組比較，卵巢癌SW626細胞的增殖受到明顯抑制，各檢測點OD值顯著升高（P<0.05）。②空白對照組和陰性對照組比較差異無顯著性意義（P>0.05）。③實驗組S1和S2組比較差異無顯著性意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：應用RNA干擾技術(shù)能特異性抑制人卵巢癌細胞的CXCR4蛋白的表達和抑制卵