慢病毒介導的HER2-siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應顯像研究.pdf

1、碩士學位論文論文題目慢病毒介導的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應顯像研究研究生姓名吳強樂指導教師姓名石怡珍專業(yè)名稱影像醫(yī)學與核醫(yī)學研究方向腫瘤核醫(yī)學論文提交日期2013年3月慢病毒介導的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應顯像研究中文摘要I慢病毒介導的HER2siRNA對人卵巢癌的基因治療及干擾效應顯像研究中文摘要目的：的：構建針對Her2neu的RNA干擾慢病毒載體，通過體內(nèi)、外實驗觀察HER2表達受抑制后

2、對卵巢癌細胞SKOV3生物學行為的影響，并利用放射性核素131I標記針對HER2的單抗Herceptin，SPECT顯像活體監(jiān)測轉(zhuǎn)導HER2siRNA后的干擾效應，初步探索SPECT在RNAi生物治療中的應用前景。方法：法：①根據(jù)Her2neu基因的cDNA序列，設計、構建及鑒定三條特異性的HER2siRNA慢病毒表達載體及一條隨機序列的陰性對照慢病毒表達載體。②將上述載體經(jīng)Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染到293T細胞中，收獲病

3、毒上清液感染人卵巢癌細胞株SKOV3，通過RTPCR篩選出干擾效率最高的重組慢病毒表達載體。③建立穩(wěn)定表達有效HER2干擾序列的SKOV3細胞株及陰性對照細胞株，組成KD1組和NC組，并以未感染的SKOV3細胞作為CON組，分別通過流式細胞儀、Westernblot及MTT法檢測各實驗組細胞HER2的表達、細胞凋亡及增殖；④將各實驗組細胞接種裸鼠，檢測成瘤率、成瘤時間、瘤體大??；免疫組化測定各實驗組HER2蛋白表達，并通過SPECT行1

4、31IHerceptin顯像，計算各實驗組腫瘤本底（TB）比值。結果：①成功構建三條HER2siRNA干擾序列重組慢病毒表達載體及陰性對照慢病毒表達載體，測序證實序列正確。②重組慢病毒表達載體感染293T細胞后，成功獲得了高滴度的病毒液。感染靶細胞后，通過RTPCR篩選出干擾效率最高的序列HER2siRNA1，其HER2mRNA抑制率為82.7%。③經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達有效干擾序列和陰性對照序列的實驗細胞株。流式細胞儀測得KD1組