BKM120聯(lián)合多西紫杉醇、曲妥珠單抗對乳腺癌細胞和干細胞作用研究.pdf

1、目的:
　　1.研究PI3K新型抑制劑BKM120對不同分子分型乳腺癌細胞系及相應(yīng)干細胞的作用，觀察BKM120對不同乳腺癌干細胞生物學特性的影響。
　　2.研究BKM120聯(lián)合多西紫杉醇對不同分子分型乳腺癌細胞系及相應(yīng)干細胞的作用，觀察BKM120聯(lián)合多西紫杉醇用藥對乳腺癌干細胞的影響。
　　3.研究BKM120聯(lián)合靶向治療藥物曲妥珠單抗對HER2陽性的SK-BR-3乳腺癌細胞系及相應(yīng)干細胞的作用，觀察BKM120聯(lián)

2、合曲妥珠單抗對乳腺癌干細胞的影響。
　　4.研究BKM120聯(lián)合多西紫杉醇在體內(nèi)實驗中對乳腺癌干細胞的作用。
　　方法:
　　1.體外細胞學實驗:采用無血清培養(yǎng)液懸浮培養(yǎng)球囊細胞的方法富集相應(yīng)乳腺癌細胞系干細胞，并經(jīng)過流式驗證其中ESA+CD44+CD24-/low細胞亞群比例。采用MTT法分別檢測BKM120、多西紫杉醇、曲妥珠單抗等單藥對不同乳腺癌細胞及其干細胞的生長抑制作用;檢測BKM120聯(lián)合多西紫杉醇、BKM

3、120聯(lián)合曲妥珠單抗對不同乳腺癌細胞和相應(yīng)干細胞的生長抑制作用，計算藥物聯(lián)合指數(shù)。通過劃痕實驗觀察單藥和聯(lián)合用藥對不同乳腺癌細胞遷移能力的影響。進一步通過球囊形成實驗分析單藥和聯(lián)合用藥對不同分子分型乳腺癌細胞系球囊形成能力的影響。利用平板克隆實驗檢測單藥和聯(lián)合用藥對不同分子分型乳腺癌細胞系克隆形成能力的影響，并分析其中的差異。采用免疫蛋白印記方法檢測單藥和聯(lián)合用藥對不同分子分型乳腺癌細胞及相應(yīng)乳腺癌干細胞中AKT, pAKT, S6，p

4、S6蛋白水平的影響。
　　2.體內(nèi)裸鼠移植瘤實驗:成功建立裸鼠乳腺癌干細胞移植瘤動物模型。隨機分組條件下，予以單藥及聯(lián)合用藥，記錄實驗期間裸鼠移植瘤體積大小變化和裸鼠體重變化，觀察藥物在體內(nèi)對乳腺癌干細胞的影響。
　　結(jié)果:
　　1.BKM120對乳腺癌細胞及干細胞的作用:在體外與對照組相比，BKM120對乳腺癌細胞及干細胞生長均具有一定的抑制作用，干細胞對BKM120具有一定的耐藥性。抑制作用呈一定的濃度劑量依賴性。

5、BKM120可以一定程度的降低乳腺癌細胞的遷移能力，減低乳腺癌細胞克隆形成能力，并可以顯著的減少乳腺癌細胞的球囊形成，并呈一定的濃度劑量相關(guān)。一定作用濃度下，BKM120可以顯著的降低乳腺癌干細胞和乳腺癌細胞中pAKT、pS6蛋白水平，并呈一定的濃度劑量依賴性。在體內(nèi)實驗中，一定劑量的BKM120可以抑制裸鼠乳腺癌干細胞移植瘤的增長，而不造成小鼠的體重明顯下降。
　　2.BKM120聯(lián)合多西紫杉醇對乳腺癌干細胞和乳腺癌細胞的作用:

6、經(jīng)過藥物聯(lián)合指數(shù)計算，兩藥聯(lián)合后呈激動作用。體外實驗中與對照組、任一單藥組相比，聯(lián)合用藥可進一步的抑制乳腺癌細胞的生長、降低乳腺癌細胞的遷移能力、減少乳腺癌細胞球囊的形成，降低乳腺癌細胞的克隆形成能力。與對照組及單藥作用組相比，雙藥聯(lián)合組更加明顯的降低了乳腺癌細胞中pAKT, pS6等蛋白水平。體內(nèi)實驗中，與對照組及任一單藥組相比，聯(lián)合用藥可更有效的遏制乳腺癌干細胞移植瘤的生長，同時未明顯降低小鼠的體重。
　　3.BKM120聯(lián)合

7、曲妥珠單抗對HER2陽性乳腺癌細胞及相應(yīng)干細胞的作用:經(jīng)過藥物聯(lián)合指數(shù)計算，兩藥聯(lián)合后呈激動作用。體外實驗中與對照組、任一單藥組相比，聯(lián)合用藥可進一步的抑制乳腺癌細胞的生長、降低乳腺癌細胞的遷移能力、減少乳腺癌細胞球囊的形成，降低乳腺癌細胞的克隆形成能力。與對照組及單藥作用組相比，雙藥聯(lián)合組更加明顯的降低了乳腺癌細胞中pAKT, pS6等蛋白水平。
　　結(jié)論:
　　1.PI3K抑制劑BKM120對乳腺癌干細胞和乳腺癌細胞生長