商品蛋雞感染禽白血病病毒的發(fā)病觀察及分離株gp85基因遺傳進(jìn)化分析.pdf

1、禽白血病(Avian leukosis，AL)是一種由反轉(zhuǎn)錄病毒科中統(tǒng)稱(chēng)為禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的禽類(lèi)多病型的腫瘤性疾病，給家禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過(guò)對(duì)來(lái)源于同一個(gè)父母代種雞場(chǎng)同時(shí)入雛的4群商品代蛋雞進(jìn)行持續(xù)的跟蹤調(diào)查和檢測(cè)，以研究雞群感染ALV的情況、雞群的發(fā)病特征和主要生產(chǎn)性能、病毒的分離鑒定及分離株gp85基因的遺傳變異情況，為今后對(duì)廣西蛋雞中AL的認(rèn)識(shí)、診斷及防控提供依據(jù)

2、。
　　在A、B、C、D四群雞中，A、C兩雞群從10周齡開(kāi)始出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。通過(guò)對(duì)發(fā)病初期的疑似病例進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)，病雞呈現(xiàn)明顯的內(nèi)臟器官腫瘤，且在A雞群病雞的胸骨內(nèi)發(fā)現(xiàn)有骨髓瘤。臨床病雞樣品的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，A雞群為ALV、馬立克氏病毒(Marek's Disease virus，MDV)陽(yáng)性及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)陰性，C雞群為MDV、REV陽(yáng)性及ALV陰

3、性;在發(fā)病后期的26周齡時(shí)，對(duì)臨床病雞樣品進(jìn)行病毒分離鑒定的結(jié)果顯示，A雞群為MDV、REV陰性及ALV陽(yáng)性，C雞群MDV、REV和ALV均為陰性;在58周齡時(shí)，隨機(jī)采集4群雞的蛋清和血漿分別進(jìn)行ALV-p27抗原檢測(cè)和ALV分離培養(yǎng)，結(jié)果表明:A、B、C和D四群雞蛋清樣品的p27抗原陽(yáng)性率分別為14.29％(15/105)、10.92％(13/119)、0％(0/104)和0％(0/104);A、B、C和D四群雞的ALV分離陽(yáng)性率分別

4、為9.78％(9/92)、5.43％(5/92)、0％(0/92)和1.09％(1/92)。
　　在產(chǎn)蛋性能方面，A、B、C和D四群雞19-72周齡入舍母雞產(chǎn)蛋率分別為76.05％、84.94％、78.29％和79.23％。粉殼雞中A雞群的產(chǎn)蛋率明顯低于B雞群，而兩群褐殼雞（C、D雞群）的產(chǎn)蛋率差異不明顯。在死淘方面，4群雞在開(kāi)產(chǎn)前（0-18周齡）的死淘率分別為37.51％、3.12％、31.78％和1.18％，在產(chǎn)蛋期（19-7

5、2周齡）的死淘率分別為18.06％、4.69％、9.58％和9.55％，A雞群的死淘率明顯高于其他雞群，而C雞群的高死淘率主要在發(fā)病階段。
　　對(duì)臨床病例進(jìn)行解剖，采集病料接種于DF-1細(xì)胞進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物分別進(jìn)行ELISA和PCR檢測(cè)后確定分離到一株ALV-J毒株，命名為GX201507。對(duì)病毒分離株的囊膜糖蛋白基因gp85進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序和遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，分離株GX201507的gp85基因全長(zhǎng)924個(gè)核苷酸，編

6、碼308個(gè)氨基酸。在分離株的gp85氨基酸全長(zhǎng)序列中，共發(fā)現(xiàn)有12個(gè)突變位點(diǎn)，其中S182G、A268V、L289H三個(gè)位點(diǎn)突變?yōu)镚X201507株所特有。進(jìn)化樹(shù)分析表明，GX201507與國(guó)內(nèi)A、B、E亞群參考株SDAU09C3、SDAU09E3、SD0501的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，分別位于不同的分支上，而與廣西地方品種雞的ALV-J參考株GX14ZS14、GX14FF01和國(guó)內(nèi)蛋雞ALV-J參考株FJ201308、GL09DP01及J亞群原

7、型株HPRS103的親緣關(guān)系較近，處于同一個(gè)分支上。gp85基因的相似性分析結(jié)果顯示，GX201507與國(guó)內(nèi)A、B、E亞群參考株SDAU09C3、SDAU09E3、SD0501的gp85氨基酸相似性較低，分別為43.7％、44.3％和43.5％;與J亞群參考株的gp85氨基酸相似性為87.8％～98.4％，其中與J亞群原型株HPRS103的相似性為95.5％，與4株廣西地方品種雞ALV-J參考株的相似性為87.8％～98.4％，與5株國(guó)

8、內(nèi)蛋雞ALV-J參考株的相似性為88.7％～98.1％，與5株國(guó)內(nèi)白羽肉雞ALV-J參考株的相似性為89.6％～92.2％，與之相似性最高的是廣西分離株GX14FF01，為98.4％。
　　本課題研究表明，來(lái)源于同一個(gè)父母代種雞場(chǎng)同時(shí)入雛的4群蛋雞中，有3群存在ALV感染，但其中僅有一群發(fā)生明顯的臨床疾病，病雞主要表現(xiàn)為內(nèi)臟器官腫瘤和胸骨骨髓瘤，且在發(fā)病早期存在ALV和MDV混合感染。發(fā)生AL的雞群的產(chǎn)蛋性能明顯低于其他同品種的正