功能納米材料在禽白血病病毒生化分析中的應用.pdf

1、禽白血病是由不同的RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的可傳播性的家禽腫瘤性疾病。近幾年來，由禽白血病引起的家禽死亡及淘汰率逐年上升，造成的經(jīng)濟損失逐年增加。除此之外，由禽白血病感染之后造成的免疫抑制和對疫苗的應答能力下降等間接損失更是無法估量。本文研究了石墨烯量子點、包銅去鐵蛋白、磁性碳納米管和中空介孔二氧化硅等納米材料及其復合材料的電化學性能，并結合分子識別、直接氧化還原、納米材料的類酶催化等方法，構建了幾種不同類型的電化學免疫傳感器，實現(xiàn)了對禽白

2、血病病毒的超靈敏檢測。主要分為以下三部分:
　　(1)本研究用石墨烯量子點和包銅去鐵蛋白作為信號放大物質(zhì)，制作了一種新穎的檢測禽白血病病毒的電化學免疫傳感器。分別以石墨烯量子點修飾電極連接一抗，復合四氧化三鐵磁珠連接二抗，實現(xiàn)三明治式的電極組裝。然后用包銅去鐵蛋白結合Fe3O4@GQDs納米粒子，將電信號活性物質(zhì)-銅納米粒子引入了傳感器體系中。當改變環(huán)境的pH值，電信號物質(zhì)被釋放到溶液中，可以通過微分脈沖伏安法對釋放出來的電信號物

3、質(zhì)進行檢測。由于石墨烯量子點有巨大的比表面積和大量的含氧官能團，可以結合更多的抗體，從而放大體系的電化學信號。去鐵蛋白提供了容納信號物質(zhì)的巨大空腔，使得檢測信號進一步被放大。實驗中，通過對比不同標記的信號探針，證實了傳感器的信號放大作用。禽白血病病毒濃度在102.08到104.50 TCID50/mL范圍內(nèi)呈很好的線性關系，在信噪比為3時，檢測限為115 TCID50/mL。實驗結果顯示該傳感器具有高的靈敏度，好的重復性和穩(wěn)定性。

4、>　　(2)本研究首次以中空介孔二氧化硅和去鐵蛋白聯(lián)合構建了一種受pH控制的新型免疫傳感器，實現(xiàn)了對禽白血病病毒的高靈敏檢測。首先，制備了環(huán)糊精功能化的石墨烯，中空介孔二氧化硅、包銅去鐵蛋白和二抗的復合物(HMS-apoferritin-Cu/Ab2-BSA)，利用TEM對CD-GS、HMS和HMS-apoferritin-Cu/Ab2-BSA探針進行了表征。然后，以CD-GS作為基底、HMS-apoferritin-Cu/Ab2-BS

5、A作為探針構建電化學免疫傳感器。利用CV對修飾電極進行了表征，研究了CD-GS的電化學性能，探討了富集時間和富集電位對響應信號的影響。最后利用DPV實現(xiàn)了對ALVs-J的高靈敏檢測，并探討了免疫傳感器的選擇性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。
　　(3)基于一種多重還原銀的信號放大方法，構建了一種三明治式的電化學免疫傳感器，實現(xiàn)了對禽白血病病毒的檢測。首先，用CD-GS修飾的裸電極連接一抗，然后用牛血清白蛋白進行活性位點的封閉，以防止非特異性的吸

6、附;經(jīng)過三明治式的電極組裝，CIMC-Au-HAs/Ab2-BSA探針被引入到免疫傳感器中，再把組裝好的電極放入含銀離子的溶液中進行銀的還原，還原出來的銀通過微分脈沖伏安法進行檢測。為了說明磁性碳納米管優(yōu)越的性能，納米金的催化還原能力和腐殖酸的優(yōu)良吸附能力，我們對不同的納米探針進行了比較。禽白血病病毒濃度在102.05到104.50 TCID50/mL范圍內(nèi)呈很好的線性關系，在信噪比為3時，檢測限為110 TCID50/mL。實驗結果顯