纈沙坦和血管緊張素Ⅱ?qū)Τ扇斯跔顒用}內(nèi)皮細胞NOS活力和NO含量的影響.pdf

1、目的:建立成人冠狀動脈內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)模型；研究纈沙坦(valsartan)和/或血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對體外培養(yǎng)的成人冠狀動脈內(nèi)皮細胞一氧化氮合酶(NOS)活力以及一氧化氮(NO)含量的影響。 方法:對急死成人左冠狀動脈前降支采用膠原酶消化法結(jié)合機械法獲得內(nèi)皮細胞，用含胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)液(DMEM)培養(yǎng)細胞并傳代，將第二代傳代細胞分成兩部分，一部分凍存?zhèn)溆茫硪徊糠滞ㄟ^倒置相差顯微鏡觀

2、察細胞形態(tài)、透射電鏡查找Weibel-Palade小體(Weibel-Paladebodys，WPBs)、免疫組織化學(xué)染色檢測Ⅷ因子相關(guān)抗原(factorⅧrelatedantigen，Ⅷ-RAg)的方法對培養(yǎng)細胞進行鑒定；復(fù)蘇上述凍存的細胞，并將其接種于5ml大小的培養(yǎng)瓶中，將細胞分為6組，即對照組、AngⅡ(濃度為10μmol/L)組、纈沙坦(濃度為10μmol/L)組和AngⅡ(濃度為10μmol/L)加3種不同濃度(0.1、1.

3、0、10μmol/L)纈沙坦組，當(dāng)?shù)谌鷤鞔毎L達培養(yǎng)瓶表面的60％時加入藥物，后3組需先加入纈沙坦預(yù)作用半小時，再加入AngⅡ，培養(yǎng)36小時后檢測內(nèi)皮細胞NOS沾力及NO含量。 結(jié)果:細胞培養(yǎng)及鑒定結(jié)果：原代培養(yǎng)的細胞24小時貼壁率為30％-40％，培養(yǎng)2天后鏡下見內(nèi)皮細胞生長，培養(yǎng)第5天細胞數(shù)量明顯增加，可達培養(yǎng)表面的40％左右，細胞突起縮短，胞體緊密相連，培養(yǎng)第7天，光鏡下可見細胞呈大片克隆狀，細胞間界限不清。第10天

4、，血管內(nèi)皮細胞基本呈單層狀，緊密排列。傳代培養(yǎng)細胞形態(tài)為多角形，邊界清楚，生長活躍，符合血管內(nèi)皮細胞生物學(xué)特性。透射電鏡觀察，胞質(zhì)內(nèi)含內(nèi)皮細胞特有的細胞器WPBs；兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色陽性，證明培養(yǎng)的細胞含有Ⅷ-RAg。藥物實驗結(jié)果：NOS活力在各組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=407.747，P=0.000)；NO含量在各組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=258.918，P=0.000)；AngⅡ組的NOS活力和NO含量明顯低于

5、對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均為0.000)；NOS活力和NO含量在纈沙坦組和對照組之間的差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均大于0.05)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+0.1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+10μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義

6、(P值均為0.000)；AngⅡ+0.1μmol/L纈沙坦組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均為0.000)；AngⅡ+1μmol/L纈沙坦組NOS活力和NO含量低于AngⅡ+10μmol/L纈沙坦組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均為0.000)。 結(jié)論：1本研究所培養(yǎng)細胞為成人冠狀動脈內(nèi)皮細胞。 2單獨應(yīng)用血管緊張素Ⅱ能降低成人冠狀動脈內(nèi)皮細胞一氧化氮合酶活力并抑制一氧化氮合成