抑癌小G蛋白ARHI與核受體TR3相互作用并通過(guò)線粒體途徑促進(jìn)人胃癌細(xì)胞的凋亡與自噬.pdf

1、ARHI是一個(gè)母源性抑癌印記基因，屬ras/rap超家族成員，在人類多種正常組織中高表達(dá)，而在人卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌等多種腫瘤中表達(dá)明顯下調(diào)或缺失。ARHI可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期控制細(xì)胞增殖，并通過(guò)多種途徑參與細(xì)胞的凋亡和自噬。核孤兒受體TR3屬于類固醇/甲狀腺受體超家族，幾乎參與人體所有組織和器官的功能調(diào)節(jié)。TR3作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因表達(dá)，參與細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控過(guò)程，還可以作為功能蛋白，通過(guò)蛋白亞細(xì)胞定位、蛋白相互作用和蛋白修飾等途

2、徑發(fā)揮作用。本課題研究?jī)蓚€(gè)蛋白是否結(jié)合及其結(jié)合模式，ARHI對(duì)TR3核漿定位及生物學(xué)功能的影響，探討兩者結(jié)合后對(duì)胃癌細(xì)胞的生物功能影響。
　　首先通過(guò)免疫熒光共聚焦及內(nèi)源性免疫共沉淀方法觀察到ARHI與TR3共定位于細(xì)胞漿，應(yīng)用外源性免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩者結(jié)合的位點(diǎn)是TR3的LBD片段和DBD片段，構(gòu)建ARHI的N端缺失突變體質(zhì)粒，用Co-IP實(shí)驗(yàn)證明了ARHI的功能區(qū)NTD在結(jié)合中的重要性。其次通過(guò)免疫熒光共聚焦及核漿分離實(shí)驗(yàn)證

3、明ARHI可使TR3滯留于細(xì)胞漿并定位于線粒體，運(yùn)用western blotting及熒光素酶LUC活性檢測(cè)方法分別證明了ARHI蛋白表達(dá)的增加可以使TR3磷酸化程度提高及TR3轉(zhuǎn)錄激活能力下降。最后通過(guò)western blotting檢測(cè)凋亡及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況提示ARHI和TR3結(jié)合促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的凋亡和自噬。
　　綜上，得出結(jié)論:ARHI能夠與TR3結(jié)合并使TR3定位于線粒體，ARHI蛋白的表達(dá)增加可以使TR3的磷酸化程