依達拉奉在脂多糖所致小鼠ARDS肺纖維化中的保護作用.pdf

1、目的：
　　建立脂多糖（LPS）誘導的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）肺纖維化的小鼠動物模型，探討抗氧化劑依達拉奉（EDA）對小鼠ARDS肺纖維化的保護作用及其相關機制。
　　方法：
　　72只雄性ICR小鼠隨機分為假手術組（Sham組）、脂多糖致傷組（LPS組）和LPS+EDA治療組（簡稱EDA組）；各組再分為1d組、3d組、7d組和14d組，每組6只。LPS組由氣道內(nèi)滴入LPS（5mg/kg，2.5mg/ml）；Sh

2、am組氣道內(nèi)滴入與LPS等量的生理鹽水；EDA組，氣道內(nèi)滴入LPS前1h和后12h，分別予以腹腔注射EDA（5mg/kg）。于各觀察終點（1d、3d、7d和14d）處死實驗小鼠，留取肺組織待檢。檢測肺組織濕/干重比（W/D），光鏡下觀察肺組織病理學改變，檢測肺組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、丙二醛（MDA）、髓過氧化酶（MPO）、Ⅰ型膠原（ColⅠ）和羥脯氨酸（HYP）水平，免疫組化法檢測肺組織內(nèi)高遷移率

3、族蛋白B1（HMGB1）的轉(zhuǎn)位，Western Blot檢測肺組織HMGB1和α-平滑肌收縮蛋白（α-SMA）的表達情況。
　　結果：
　?。?）與同時間點Sham組相比，LPS-1d、3d組和EDA-1d、3d組小鼠肺組織的W/D比值增加顯著（p<0.05）；EDA-1d、3d組小鼠肺組織的W/D比值顯著低于同時間點的LPS組（p<0.05）。提示EDA可以顯著改善LPS所致ARDS小鼠的肺水腫程度。
　?。?）光鏡

4、下觀察：與同時間點Sham組比較，LPS組小鼠肺組織毛細血管擴張充血，肺泡間隔明顯增寬，見大量炎性細胞浸潤和大量紅細胞漏出，肺泡腔和間質(zhì)水腫明顯，嚴重者可見部分肺泡腔萎陷不張、肺泡斷裂。與LPS組同時間點比較，EDA組正常肺泡結構破壞較少，肺組織炎性細胞浸潤及紅細胞的漏出較輕，肺泡腔滲出和肺間質(zhì)腫脹程度明顯減輕。LPS-3d組小鼠肺組織除了見大量中性粒細胞浸潤和肺泡間隔增寬外，還可見纖維母細胞、肌纖維母細胞增生。EDA-3d組與LPS-

5、3d組比較，小鼠肺組織纖維母細胞、肌纖維母細胞增生不明顯。提示LPS氣道內(nèi)滴注可以誘發(fā)小鼠產(chǎn)生ARDS的肺部病理學改變，EDA可以顯著減輕ARDS小鼠肺組織的炎癥反應，減少肺泡結構的破壞，可能還部分減弱肺組織的纖維化改變。
　?。?）LPS組和EDA組小鼠在接受LPS氣道內(nèi)滴注后1d，肺組織TNF-α和IL-1β含量明顯升高，隨后逐漸降低。與同時間點Sham組比較，LPS組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β含量增加明顯（p<0.05

6、）。EDA組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β含量明顯少于與同時間點的LPS組（p<0.05）。
　?。?）LPS-1d組小鼠肺組織MDA含量和MPO活性顯著上升，之后逐漸降低。與同時間點Sham組比較，LPS組MDA含量明顯增加(p<0.01)。EDA-1d組小鼠肺組織中MDA含量與LPS-1d組相比無顯著差異（p>0.05），EDA-3d、7d、14d組小鼠肺組織中MDA含量明顯低于同時間點的LPS組（p<0.05）。LPS-1

7、d、3d、7d組小鼠肺組織中MPO活性明顯高于同時間點Sham組（p<0.05），EDA-1d、3d、7d組小鼠肺組織中的MPO活性顯著低于與同時間點的LPS組（p<0.05）。14d時，Sham組、LPS組和EDA組小鼠肺組織中的MPO活性無顯著差異。提示LPS氣道滴注早期就可以導致激活小鼠肺組織的炎癥反應和增加氧自由基的釋放；EDA可以通過抑制炎癥反應、清除氧自由基，減輕氧化應激反應，具有抗氧化的作用。
　?。?）免疫組化結果

8、提示，LPS誘導后，小鼠肺組織HMGB1的表達主要定位在胞漿，與同時間點Sham組相比，LPS組小鼠肺組織單核巨噬細胞浸潤明顯較多，HMGB1陽性免疫反應產(chǎn)物較多；EDA組小鼠肺組織單核巨噬細胞浸潤和HMGB1表達強度與同時間點LPS組比較有所減少。Western Blot結果顯示，LPS組和EDA組小鼠肺組織HMGB1相對表達量逐漸升高，3d時達到最高值，隨后逐步減少。與同時間點Sham組相比，LPS組和EDA組小鼠肺組織HMGB1相

9、對表達量均有顯著增加（p<0.05)。EDA組小鼠肺組織HMGB1相對表達量明顯低于與同時間點LPS組（p<0.05)。提示LPS氣道內(nèi)滴注可以導致小鼠肺組織HMGB1表達增加，EDA可以抑制HMGB1的表達。
　?。?）LPS組和EDA組小鼠肺組織α-SMA相對表達量和ColⅠ、HYP含量逐漸升高，3d時達到最高值，隨后逐步減少。與同時間點Sham組相比，LPS組小鼠肺組織α-SMA相對表達量和ColⅠ、HYP含量顯著增加（p<

10、0.05)。EDA-1d、3d、7d組小鼠肺組織α-SMA相對表達量顯著低于同時間點LPS組（p<0.05）。而EDA組小鼠肺組織的ColⅠ、HYP含量顯著低于與同時間點LPS組（p<0.05)。提示LPS氣道滴注可以導致小鼠肺組織早期的纖維增生表現(xiàn)，EDA可以減輕LPS所致小鼠ARDS肺纖維化改變。
　　結論：
　　本實驗通過建立氣道內(nèi)滴注LPS所致ARDS肺纖維化的小鼠動物模型，研究了抗氧化劑EDA對LPS所致小鼠ARD