香蕉汁青霉菌菌株篩選及其抗氧化物質(zhì)的分離提取和抗氧化活性研究.pdf

1、[目的]
　　 大量研究證實(shí)自由基與機(jī)體的許多功能障礙和疾病的發(fā)生密切相關(guān)，抗氧化劑可以清除人體內(nèi)多余的自由基而保護(hù)機(jī)體免受自由基的損傷。人工抗氧化劑毒性大，應(yīng)用的效果很不理想，高效、安全、天然的抗氧化劑成為研究的熱點(diǎn)。本課題組在加工香蕉果汁時(shí)發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)瓶裝果汁在放置超過半年以后，即使加入了足量的抗氧化劑(維生素C、檸檬酸等)，果汁仍然會(huì)發(fā)生非酶促變黑作用，由原來的淺橙黃色變成棕褐色。有少數(shù)消毒不嚴(yán)格的香蕉汁中有少量青霉菌生

2、長(zhǎng)，而此香蕉汁的顏色并沒有變深，本課題組成功的分離出此青霉菌，并對(duì)其進(jìn)行了初步的培養(yǎng)和鑒定，發(fā)現(xiàn)能抗香蕉汁非酶促變黑作用的抗氧化物質(zhì)存在于青霉菌胞外，即存在于培養(yǎng)液中，并且此抗氧化物質(zhì)的抗氧化作用相當(dāng)強(qiáng)大。本課題擬從香蕉汁分離的青霉菌培養(yǎng)液中分離提取抗氧化物質(zhì)，并研究其抗氧化活性，探討其在生物醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用的可能性，為進(jìn)一步研究此抗氧化物質(zhì)的抗氧化機(jī)制提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 從低溫保存的10株青霉菌菌

3、株中篩選出產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)活性最強(qiáng)的青霉菌菌株；優(yōu)化產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)青霉菌的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件；青霉菌培養(yǎng)液濃縮，分別用石油醚和乙酸乙酯萃取，各相濃縮至干，甲醇溶解；采用大孔樹脂NKA-9粗分離和葡聚糖凝膠Sephadex G-75細(xì)分離來分離培養(yǎng)液中水相抗氧化物質(zhì)；采用大孔樹脂HP20和硅膠柱層析分離乙酸乙酯相抗氧化物質(zhì)；采用南京建成生物工程研究所的總抗氧化能力試劑盒、普魯士蘭法、DPPH自由基清除法、水楊酸捕捉法和改良鄰苯三酚自氧化法測(cè)定

4、抗氧化組份的總抗氧化能力、還原能力、DPPH自由基清除能力、對(duì)·OH和O2-·的清除能力等體外抗氧化活性；觀察抗氧化物質(zhì)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的培養(yǎng)PC12細(xì)胞的損傷的保護(hù)作用。
　　 [結(jié)果]
　　 1.確定產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)最強(qiáng)的青霉菌菌株是P6菌株。
　　 2.產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)的青霉菌搖床培養(yǎng)基組成是：葡萄糖20g，胰蛋白胨10g，蒸餾水1L，分裝，115℃高壓蒸汽滅菌20分鐘；發(fā)酵條件是：溫度28℃、轉(zhuǎn)速160rpm/

5、min、pH6.5、接種量12％搖床培養(yǎng)。
　　 3.培養(yǎng)液經(jīng)過石油醚抽提后乙酸乙酯萃取，分別對(duì)水相和乙酸乙酯相進(jìn)行總抗氧化能力的檢測(cè)，結(jié)果顯示水相和乙酸乙酯相均有抗氧化活性，但以乙酸乙酯相抗氧化活性為高。
　　 4.水相抗氧化物質(zhì)經(jīng)過大孔樹脂NKA-9柱層析，收集到35％乙醇洗脫時(shí)的洗脫峰，真空干燥濃縮得到樣品A；樣品A經(jīng)過葡聚糖凝膠G-75柱層析，收集到一個(gè)洗脫峰，真空干燥濃縮得到樣品B。乙酸乙酯相抗氧化物質(zhì)經(jīng)過大孔

6、樹脂HP20柱層析，收集到20％乙醇相沈脫峰，真空干燥濃縮，得到樣品C。樣品C經(jīng)過硅膠柱層析得到總抗氧化能力較強(qiáng)的組份樣品D。
　　 5.樣品A、B、C和D均有抗氧化活性，總抗氧化能力強(qiáng)弱的順序是樣品D>樣品C>樣品B>樣品A。樣品A、B、C和D在不同濃度梯度具有一定的還原能力，樣品A、B、C和D均具有清除DPPH自由基的能力，樣品D和C具有較強(qiáng)的清除·OH和清除O2-·的能力。
　　 6.樣品C和D均能減少H2O2對(duì)P