多通道二維色譜分離松多酚及對(duì)抗氧化物質(zhì)的活性跟蹤.pdf

1、二維色譜是分離、分析復(fù)雜組分物質(zhì)的最有效方法之一,有著傳統(tǒng)分離技術(shù)無(wú)法比擬的優(yōu)點(diǎn),能快速、有效地將復(fù)雜組分分離成單一組分物質(zhì),但是其分離純化量少,多應(yīng)用于微量物質(zhì)的分析鑒定,欠缺制備方面研究和應(yīng)用。因此本課題組在二維色譜和傳統(tǒng)柱色譜的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)構(gòu)建了多通道二維色譜分離設(shè)備,研究其在制備方面的應(yīng)用。本文以多通道二維色譜為研究基礎(chǔ),以松多酚為研究對(duì)象,系統(tǒng)的研究了多通道二維色譜分離松多酚的工藝條件、多通道二維色譜對(duì)松多酚抗氧化物質(zhì)的活性跟

2、蹤以及其抗氧化功能研究。研究的主要內(nèi)容如下:
　　根據(jù)多通道二維色譜的設(shè)計(jì)原理,成功構(gòu)建了多通道二維色譜分離設(shè)備;然后以藍(lán)莓果渣為原料,采用兩種不同規(guī)格的色譜柱進(jìn)行多通道二維色譜分離效果的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,較藍(lán)莓果渣提取液,多通道二維色譜分離的藍(lán)莓花色苷的純度有很大提高,最大提高了8.59倍,可推知多通道二維色譜對(duì)天然植物活性物質(zhì)具有分離能力。
　　以紅松松塔為原料,選取固相介質(zhì)、洗脫劑、上樣量、上樣濃度、洗脫速度以及色譜

3、柱數(shù)量6個(gè)因素為研究對(duì)象,對(duì)多通道二維色譜分離松多酚的條件進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)靜態(tài)吸附和解吸實(shí)驗(yàn),確定了吸附和解吸效果均佳的X-5大孔樹脂作為固相介質(zhì),解吸效果最優(yōu)的0.5％甲酸-60%乙醇溶液為洗脫劑。然后,利用多通道二維色譜設(shè)備進(jìn)行單因素動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)及響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn),確定上樣量、上樣濃度、洗脫速度和色譜柱數(shù)量4個(gè)因素的最佳值,結(jié)果分別為260mg、2.0mg/mL、200±20ml/min和4色譜柱聯(lián)用。此條件下,多通道二維色譜分離設(shè)備對(duì)多酚

4、的分離有著很好的效果,使松多酚純度由2.37%提高到了20.36%,純化倍數(shù)高達(dá)8.59倍。
　　采用MTT法測(cè)定總還原能力最強(qiáng)組分和羥自由基清除能力最佳組分對(duì)小鼠脾細(xì)胞的增殖作用,結(jié)果顯示,兩抗氧化組分對(duì)小鼠脾細(xì)胞具有促增殖作用,總還原能力最強(qiáng)組分在5.0ug/ml濃度時(shí),脾細(xì)胞的增殖率最高,可達(dá)15%左右;羥自由基清除能力最強(qiáng)組分在20ug/ml濃度時(shí),脾細(xì)胞增殖率最好,可達(dá)10%。
　　采用H2O2誘導(dǎo)法構(gòu)建小鼠脾細(xì)胞

5、氧化損傷模型,在氧化損傷防護(hù)實(shí)驗(yàn)中,兩抗氧化組分對(duì)脾細(xì)胞氧化損傷均具有一定的防護(hù)作用,總還原能力最強(qiáng)組分在高劑量(160ug/ml)時(shí)對(duì)脾細(xì)胞氧化損傷的防護(hù)效果最佳,而羥自由基清除能力最佳組分在中劑量(40ug/ml)時(shí)效果最佳。在修復(fù)實(shí)驗(yàn)中,2種抗氧化組分均在中劑量時(shí)對(duì)脾細(xì)胞氧化損傷的修復(fù)效果較佳,高、低劑量對(duì)脾細(xì)胞氧化損傷沒(méi)有明顯的修復(fù)作用。同時(shí)在成分分析中,2種抗氧化組分的活性成分多酚、黃酮和花青素的含量比分別為250:75:7和