環(huán)磷酰胺、噻替哌誘導(dǎo)人支氣管上皮細胞致癌性轉(zhuǎn)化及相關(guān)機制的研究.pdf

1、博士后研究工作報告環(huán)磷酰胺、噻瞢哌誘導(dǎo)人支氣管上皮細胞致癌性轉(zhuǎn)化及相關(guān)機制的研究博士后姓名袁素波流動站( 一級學(xué)科) 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)專業(yè)( 二級學(xué)科) 毒理學(xué)研究工作起始時間1 9 9 7 年9 月研究工作完成時間1 9 9 9 年1 2 月軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所( 北京)4 ．本文首次提出：永生化支氣管上皮細胞受化學(xué)致癌原環(huán)磷酰胺、噻替哌遺傳毒作用而介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)化過程，就是以纖毛細胞為主要組份的B E A S

2、．2 B 細胞群體向B E A S ．C P 、B E A S ．T 細胞以增生基細胞為主要份額的轉(zhuǎn)化細胞群體的遷移過程。實際上也就是攜帶突變的基細胞所構(gòu)成的轉(zhuǎn)化型細胞克隆的不斷擴增并成為細胞群主體的過程，所有轉(zhuǎn)化細胞均起源于突變的基細胞。該過程可能也存在于其它理化致癌原所引起的細胞轉(zhuǎn)化過程。但需迸一步的試驗支持。5 ．環(huán)磷酰胺、噻替哌轉(zhuǎn)化細胞的形態(tài)學(xué)特征：細胞面積相關(guān)參數(shù)按B E A S ．2 B 、B E A S —C P 、B E

3、 A S ．T 的順序遞升。表達細胞形態(tài)為異形的指標(biāo)則沿B E A S ．2 B 、B E A s ．c P 、B E A s - T 的順序遞減。這一結(jié)果符合本文發(fā)現(xiàn)的細胞轉(zhuǎn)化過程中纖毛細胞數(shù)量由多至少，基細胞數(shù)量由少至多，轉(zhuǎn)化型細胞克隆逐漸擴增的規(guī)律。該現(xiàn)象也是支氣管、乳腺、結(jié)腸等部位正常組織一癌前增生一癌的病理學(xué)歷程中所出現(xiàn)的體視學(xué)特征，擬認為是細胞由正常趨向惡化的共有形態(tài)特征。6 ．超微結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)化第O 代( 藥物處理2

4、4 小時后) ，細胞以死亡和凋亡現(xiàn)象為主：轉(zhuǎn)化早中期，B E A S —c P 、B E A S ．T 細胞因致癌物的不同而呈現(xiàn)不同程度的以基細胞增生為主的增生圖像。7 ．觀察到的細胞周期紊亂始于B E A s ．C P l 7 代、B E A S ．T 1 8 代，及至2 7 、2 8 代時S 、G 2 ／M 期細胞比例較對照細胞明顯增高，顯示轉(zhuǎn)化細胞細胞周期向s 、G 2 ／M期遷移，表明細胞的增殖活躍。8 ．染色體改變情況：B E

5、 A S 一2 B 細胞染色體眾數(shù)4 6 條，近二倍體核型，攜帶有M 1 、M 2 、M 3 三個標(biāo)志染色體，在連續(xù)培養(yǎng)至2 3 代后，細胞染色體仍保持穩(wěn)定核型。9 ．B E A s ．C P 細胞為二倍體核型，細胞轉(zhuǎn)化中期( 1 5 p ) 發(fā)生1 4 號染色體的丟失l 條和M 4 的形成，M 4 一直持續(xù)存在可能作為環(huán)磷酰胺引起的染色體原始損傷參與轉(zhuǎn)化啟動，并與轉(zhuǎn)化進展和細胞增殖有關(guān)。1 0 ．B E A S ．T 是多倍體細胞，1

6、 5 p 以后部分細胞發(fā)生1 4 號和2 1 染色體丟失1 條，同期多倍體細胞比例明顯上升，軟瓊脂克隆形成率增高，推測1 4 、2 1 號染色體的丟失與轉(zhuǎn)化進展和多倍體細胞群體的形成有關(guān)；B E A s ．T 軟瓊脂克隆細胞( B E A S ·s T ) 非穩(wěn)定性畸變頻率急劇上升( 從2 5 D 時3 ％升至B E A s ．s T 細胞3 4 ％) ，提示非穩(wěn)定性畸變細胞是轉(zhuǎn)化細胞中具有較強的增殖能力、較好的三維空間生長能