阿魏酸鈉對(duì)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的: 研究阿魏酸鈉(ferulate sodium SF)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)引起的人視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelial HRPE)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,探討阿魏酸鈉在年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)防治中的應(yīng)用可能性。 方法: 體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(HRPE),待接種在培養(yǎng)板上的細(xì)胞生長(zhǎng)接近融合時(shí)分為4組:空白對(duì)照組(正常培養(yǎng))、過(guò)氧化氫(H2O

2、2)組、阿魏酸鈉(SF)組和過(guò)氧化氫+阿魏酸鈉組??瞻讓?duì)照組:培養(yǎng)液換為不含血清的F12培養(yǎng)基;過(guò)氧化氫組:以含有過(guò)氧化氫(濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0mmol/L)的無(wú)血清F12培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),尋找合適的過(guò)氧化氫濃度,用以造成氧化損傷模型;阿魏酸鈉組:以含有阿魏酸鈉(濃度分別為1、3、10、30、100、300μg/ml)的無(wú)血清F12培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)

3、24小時(shí),檢測(cè)SF對(duì)細(xì)胞的增殖的影響;過(guò)氧化氫+阿魏酸鈉(SF)組:以含有阿魏酸鈉(濃度分別為1、3、10、30、100、300μg/ml)的無(wú)血清F12培養(yǎng)液預(yù)作用1小時(shí),加入根據(jù)過(guò)氧化氫組實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定濃度(0.4 mmol/L)的過(guò)氧化氫,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),找出合適的阿魏酸鈉實(shí)驗(yàn)濃度以用于下一步的實(shí)驗(yàn)。以MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,分光光度計(jì)法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、總

4、抗氧化能力(T-AOC)的活性和丙二醛(MDA)含量的變化;AO/EB、hoechst試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡,從而評(píng)價(jià)細(xì)胞氧化損傷的變化情況。 結(jié)果: 1.H2O2組與空白對(duì)照組相比較,HRPE細(xì)胞的活性隨H2O2濃度增加而降低,從濃度0.2mmol/l開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;H2O2濃度為0.4mmol/l時(shí)細(xì)胞活性為空白對(duì)照組的50%,選作下一步的實(shí)驗(yàn)濃度。阿魏酸鈉組與空白對(duì)照組比較,HRPE細(xì)胞活性無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即

5、阿魏酸鈉對(duì)細(xì)胞的增殖無(wú)明顯影響。阿魏酸鈉干預(yù)組的細(xì)胞活性較H2O2組升高,在SF濃度為3μg/ml、10μg/ml時(shí),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在SF10μg/ml濃度時(shí)活性最高,選作下一步實(shí)驗(yàn)。2.H2O2組與空白對(duì)照組相比,HRPE細(xì)胞內(nèi)CAT、GSH-PX、T-AOC活性降低,MDA的含量增加;與H2O2組比較,SF干預(yù)組CAT、GSH-PX、T-AOC活性明顯升高,MDA含量減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.H2O2組HRPE細(xì)胞較空白對(duì)

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