阿魏酸鈉對體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 研究阿魏酸鈉(ferulate sodium SF)對過氧化氫(H2O2)引起的人視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelial HRPE)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制，探討阿魏酸鈉在年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)防治中的應(yīng)用可能性。 方法： 體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(HRPE)，待接種在培養(yǎng)板上的細(xì)胞生長接近融合時(shí)分為4組：空白對照組(正常培養(yǎng))、過氧化氫(H2O

2、2)組、阿魏酸鈉(SF)組和過氧化氫+阿魏酸鈉組?？瞻讓φ战M：培養(yǎng)液換為不含血清的F12培養(yǎng)基；過氧化氫組：以含有過氧化氫(濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0mmol/L)的無血清F12培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，尋找合適的過氧化氫濃度，用以造成氧化損傷模型；阿魏酸鈉組：以含有阿魏酸鈉(濃度分別為1、3、10、30、100、300μg/ml)的無血清F12培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)

3、24小時(shí)，檢測SF對細(xì)胞的增殖的影響；過氧化氫+阿魏酸鈉(SF)組：以含有阿魏酸鈉(濃度分別為1、3、10、30、100、300μg/ml)的無血清F12培養(yǎng)液預(yù)作用1小時(shí)，加入根據(jù)過氧化氫組實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定濃度(0.4 mmol/L)的過氧化氫，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，找出合適的阿魏酸鈉實(shí)驗(yàn)濃度以用于下一步的實(shí)驗(yàn)。以MTT法檢測細(xì)胞活性，分光光度計(jì)法測定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、總

4、抗氧化能力(T-AOC)的活性和丙二醛(MDA)含量的變化；AO/EB、hoechst試劑盒檢測細(xì)胞凋亡，從而評價(jià)細(xì)胞氧化損傷的變化情況。 結(jié)果： 1.H2O2組與空白對照組相比較，HRPE細(xì)胞的活性隨H2O2濃度增加而降低，從濃度0.2mmol/l開始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；H2O2濃度為0.4mmol/l時(shí)細(xì)胞活性為空白對照組的50％，選作下一步的實(shí)驗(yàn)濃度。阿魏酸鈉組與空白對照組比較，HRPE細(xì)胞活性無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即

5、阿魏酸鈉對細(xì)胞的增殖無明顯影響。阿魏酸鈉干預(yù)組的細(xì)胞活性較H2O2組升高，在SF濃度為3μg/ml、10μg/ml時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在SF10μg/ml濃度時(shí)活性最高，選作下一步實(shí)驗(yàn)。2.H2O2組與空白對照組相比，HRPE細(xì)胞內(nèi)CAT、GSH-PX、T-AOC活性降低，MDA的含量增加；與H2O2組比較，SF干預(yù)組CAT、GSH-PX、T-AOC活性明顯升高，MDA含量減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.H2O2組HRPE細(xì)胞較空白對