泛素連接酶hHrd1在帕金森病大鼠模型中的表達(dá)及其意義.pdf

1、泛素蛋白酶體通路是真核細(xì)胞內(nèi)降解調(diào)節(jié)因子等短壽蛋白的重要途徑，它參與細(xì)胞內(nèi)很多重要的生理生化過程，如DNA修復(fù)、細(xì)胞周期的運(yùn)轉(zhuǎn)、信號(hào)傳遞、抗原的呈遞、蛋白的跨膜定位等[1]。近年發(fā)現(xiàn)泛素－蛋白酶體系統(tǒng)可能與神經(jīng)變性疾病的病理過程有關(guān)，認(rèn)為泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的損害造成細(xì)胞內(nèi)的異常蛋白質(zhì)聚集，異常聚集的蛋白質(zhì)造成神經(jīng)元的凋亡，可能是帕金森病(Parkinson'sDisease，PD)多巴胺能神經(jīng)元缺失的機(jī)制。 目的：①制作帕金森病

2、大鼠模型，并以間腦多巴胺含量及超微結(jié)構(gòu)的變化評(píng)定；②觀察此模型學(xué)習(xí)記憶能力的變化；③定位定量檢測(cè)泛素連接酶hHrd1在PD模型中的表達(dá)，并探討其意義。 方法：①應(yīng)用立體定向儀，經(jīng)大鼠黑質(zhì)和內(nèi)側(cè)前腦束兩靶點(diǎn)微量注射6-OHDA，制作帕金森病模型，2周后阿撲嗎啡腹腔注射，篩選成功模型。毛細(xì)管電泳法測(cè)定PD模型間腦多巴胺含量，透射電鏡觀察黑質(zhì)區(qū)域超微結(jié)構(gòu)的變化。②分別在術(shù)后一月和術(shù)后三月用Morris水迷宮檢測(cè)模型學(xué)習(xí)記憶障礙；③免疫

3、組化檢測(cè)泛素連接酶hHrd1在PD模型中的表達(dá)，westernblot定量分析。 結(jié)果：①注射6-OHDA到黑質(zhì)和內(nèi)側(cè)前腦束雙靶點(diǎn)，通過大鼠旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)測(cè)試，造模成功率為68％，損毀側(cè)多巴胺含量明顯減少，黑質(zhì)神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊性擴(kuò)張、脫顆粒，髓鞘擴(kuò)張。②PD模型鼠尋找平臺(tái)的游泳距離明顯增加，且呈時(shí)間依賴關(guān)系。③泛素連接酶hHrd1在PD模型中呈高表達(dá)，且呈區(qū)域性，如黑質(zhì)、紅核、中縫核及韁內(nèi)側(cè)核呈強(qiáng)陽性。