狂犬病毒CVS株核蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)和鑒定.pdf

1、目的：構(gòu)建原核表達(dá)系統(tǒng)對狂犬病毒(RV)CVS株的核蛋白(NP)進(jìn)行表達(dá)和純化，并在大腸桿菌中表達(dá)對其進(jìn)行初步的抗原性檢測。表達(dá)的目的蛋白為進(jìn)一步研發(fā)狂犬血清學(xué)檢測試劑盒提供抗原。 方法：以重組質(zhì)粒Teasy-RVNP為模板，利用PCR方法擴(kuò)增狂犬病毒(RV)CVS株核蛋白(NP)的DNA片段，并重組入原核高效表達(dá)載體pET-15b。用酶切電泳驗證重組結(jié)果的正確性：并通過測序檢查質(zhì)粒重組后序列有無變化。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌BL21

2、，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目蛋白進(jìn)行表達(dá)。研究誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)劑濃度等對表達(dá)蛋白量的影響，對蛋白表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。并對表達(dá)得到得包涵體蛋白進(jìn)行了洗滌。后用SDS-PAGE與Western-blot鑒定其抗原性。 結(jié)果：經(jīng)過篩選得到含狂犬病毒N基因片斷的原核表達(dá)載體，測序檢查證明目的基因序列無變化。獲得表達(dá)狂犬病毒核蛋白的重組菌，IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE電泳結(jié)果表明，在51KDa，處有一條蛋白表達(dá)帶，大小與預(yù)期相符。Wes