癲癇模型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘改變及其對(duì)癲癇治療意義的研究.pdf

1、目的：
　　癲癇是一種慢性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，主要以反復(fù)出現(xiàn)的自發(fā)性發(fā)作為特點(diǎn)。同時(shí)，這種自發(fā)性再發(fā)作在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘疾病中又有一個(gè)較高的發(fā)生率。并且，國際上有報(bào)道提示在一些癲癇患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)生了脫髓鞘改變。上述現(xiàn)象提示脫髓鞘改變與癲癇發(fā)作之間存在著某種聯(lián)系，但是，目前尚沒有確鑿的實(shí)驗(yàn)證據(jù)來支持二者之間的聯(lián)系。本研究希望通過建立大鼠急慢性癲癇模型、腦電監(jiān)測、免疫蛋白定量分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定和免疫組織化學(xué)等方法，檢測

2、癲癇發(fā)作是否可以使模型動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)作髓鞘改變，進(jìn)而探討其可能的發(fā)生機(jī)制和對(duì)癲癇發(fā)作的影響。
　　方法：
　　1．急性青霉素癲癇模型中髓鞘改變的研究：通過單次皮層內(nèi)注射青霉素建立SD大鼠急性癲癇模型，以行為學(xué)和腦電監(jiān)測確定模型成功后，通過WesternBlot方法檢測模型大鼠海馬與大腦皮層的髓鞘堿性蛋白（MBP），來觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘改變情況。
　　2．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘改變的研究：通過系統(tǒng)性給予大鼠腹

3、腔注射閾下劑量的戊四氮（PTZ）建立慢性癲癇模型，以行為學(xué)和腦電監(jiān)測確定模型成功后，通過在2周、4周和6周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行WesternBlot檢測模型大鼠海馬與大腦皮層的MBP，來觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘有無破壞。
　　3．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘改變發(fā)生機(jī)制的研究：通過免疫組織化學(xué)熒光染色檢測正常與模型組大鼠海馬與大腦皮層是否存在NG2陽性細(xì)胞表達(dá)差異，以期觀察髓鞘改變與少突膠質(zhì)細(xì)胞的可能關(guān)系；通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢

4、測正常與模型組大鼠血清中抗MBP抗體的水平，以期觀察髓鞘改變與免疫反應(yīng)的可能關(guān)系；通過在2周、4周和6周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察正常與模型組大鼠尾靜脈注射伊文氏藍(lán)（EB）后海馬與大腦皮層腦組織切片血腦屏障（BBB）通透性的變化，以期觀察髓鞘改變與BBB損傷的可能關(guān)系；綜合以上方法闡明PTZ誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇發(fā)作過程中髓鞘破壞的發(fā)生機(jī)制。
　　4．脫髓鞘治療藥物癲癇發(fā)作預(yù)防作用的研究：通過預(yù)防性給予治療劑量脫髓鞘疾病免疫調(diào)節(jié)劑醋酸格拉替雷（GA

5、），觀察系統(tǒng)給藥后由PTZ誘導(dǎo)的大鼠慢性癲癇發(fā)作行為學(xué)表現(xiàn)和腦電監(jiān)測結(jié)果的變化，進(jìn)而探討藥物對(duì)抗髓鞘破壞在癲癇發(fā)作中的保護(hù)作用。
　　結(jié)果：
　　1．急性青霉素癲癇模型中髓鞘未受影響：行為學(xué)和腦電記錄結(jié)果顯示青霉素成功誘導(dǎo)大鼠急性癲癇發(fā)作，但是WesternBlot結(jié)果顯示模型組大鼠海馬與大腦皮層未觀察到MBP的表達(dá)變化，說明青霉素急性癲癇模型中髓鞘未受到影響。
　　2．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘發(fā)生破壞：行為學(xué)和腦電記

6、錄結(jié)果顯示PTZ成功誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇發(fā)作，隨著PTZ給藥時(shí)間的延長，癲癇發(fā)作的程度加重、頻率增高。2周、4周和6周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的WesternBlot檢測結(jié)果發(fā)顯示，模型組大鼠海馬與大腦皮層的MBP表達(dá)均較正常對(duì)照組減少，但是三個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的模型組MBP表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明髓鞘在PTZ誘導(dǎo)的大鼠慢性癲癇發(fā)作過程早期即發(fā)生破壞性改變。但是，這種改變并沒有隨著PTZ誘導(dǎo)癲癇發(fā)作的加重而進(jìn)一步惡化。
　　3．慢性戊四氮癲癇模型中髓鞘破

7、壞的可能機(jī)制：通過免疫組織化學(xué)熒光染色方法，本研究證實(shí)PTZ誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇發(fā)作早期出現(xiàn)的髓鞘破壞不是繼發(fā)于少突膠質(zhì)細(xì)胞本身的破壞；而PTZ誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇發(fā)作過程中出現(xiàn)血腦屏障通透性增高和外周血液循環(huán)中產(chǎn)生針對(duì)大鼠自身中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抗MBP抗體，這兩項(xiàng)結(jié)果提示自身免疫反應(yīng)可能是PTZ誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇過程中髓鞘破壞的原因。
　　4．GA對(duì)PTZ誘導(dǎo)的大鼠慢性癲癇發(fā)作的預(yù)防治療效果：在2周、4周和6周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)大鼠行為學(xué)觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)

8、果顯示，GA預(yù)防治療組大鼠的癲癇發(fā)作頻率均低于對(duì)照組，并且三個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間癲癇發(fā)作頻率沒有顯著差別，說明GA將癲癇發(fā)作控制在較低水平；但是，腦電圖監(jiān)測結(jié)果顯示，GA治療組的自發(fā)性癲癇樣放電與對(duì)照組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明GA對(duì)PTZ誘導(dǎo)的大鼠慢性癲癇發(fā)作的自發(fā)性癲癇放電沒有影響。
　　結(jié)論：
　　1．通過觀察急慢性癲癇模型中的MBP的變化，本研究首次發(fā)現(xiàn)青霉素誘導(dǎo)大鼠急性癲癇發(fā)作中未存在髓鞘破壞，而PTZ誘導(dǎo)大鼠慢性癲癇發(fā)作中