五羥色胺對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及對(duì)其分泌IL-11及IL-6的影響.pdf

1、背景與目的:血小板減少癥是大劑量化療、放療以及造血干細(xì)胞移植的主要副作用和并發(fā)癥。血小板生成是在巨核細(xì)胞增殖分化的基礎(chǔ)上進(jìn)行的,因此,尋找一種物質(zhì)代替或是輔助促血小板生成因子,促進(jìn)巨核系造血,以快速增加循環(huán)中的血小板數(shù)量,就顯得非常重要。我們可以借助某種物質(zhì),從其促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖分化入手,明確該物質(zhì)促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖分化的特點(diǎn)及機(jī)制,了解巨核系造血的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特點(diǎn),為研究新藥物提供新的思路。這種作為研究媒介的物質(zhì)必須是可以直接促進(jìn)巨核細(xì)胞分

2、化增殖,或是通過影響骨髓造血微環(huán)境中的間充質(zhì)干細(xì)胞而間接促進(jìn)巨核系造血,或是既可以直接促進(jìn)巨核系造血,又可同時(shí)影響骨髓微環(huán)境中的間充質(zhì)干細(xì)胞而間接促進(jìn)巨核細(xì)胞分化。
　　本研究組在前期工作中,已經(jīng)證實(shí)了五羥色胺(5-HT)有促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖和分化功能,同時(shí),5-HT也有顯著的抗巨核細(xì)胞凋亡作用。這說明5-HT具有直接促進(jìn)巨核系造血的作用,那么,5-HT是否也存在影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞從而發(fā)揮間接促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖分化的作用?
　

3、　本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察5-HT對(duì)體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的促增殖作用,及對(duì)其分泌分泌細(xì)胞因子IL-11、IL-6的影響,探討5-HT能否促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖,并同時(shí)增進(jìn)IL-11、IL-6的分泌,從而間接促進(jìn)巨核細(xì)胞增殖。
　　材料和方法:取3-5周齡BABL/c小鼠的股骨和脛骨骨髓懸液,應(yīng)用Percoll分離液分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外有血清培養(yǎng)P0及P1,P2代轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng),培養(yǎng)3天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞分為5-HT100nm

4、ol/L組、200nmol/L組、400nmol/L組和5-HT0nmol/L的對(duì)照組共4組。采用倒置顯微鏡觀察不同濃度5-HT作用下0小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)及48小時(shí)等不同時(shí)間段巨核細(xì)胞的增殖情況,采用激光共聚焦顯微鏡研究不同濃度5-HT作用下和對(duì)照組在5個(gè)不同時(shí)間段時(shí)細(xì)胞胞漿IL-11、IL-6量的變化,以及通過應(yīng)用ELISA方法檢測相對(duì)應(yīng)時(shí)間段細(xì)胞培養(yǎng)上清液中上述兩種細(xì)胞因子量的變化情況。
　　結(jié)果:各5-HT濃度

5、組與對(duì)照組比較顯示其對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均具有促進(jìn)增殖作用,其中200nmoml/L時(shí)的促增殖作用最強(qiáng),并以24小時(shí)時(shí)作用效果最明顯。激光共聚焦顯微鏡檢測不同濃度組在不同時(shí)間段細(xì)胞漿內(nèi)IL-11、IL-6的量發(fā)現(xiàn),200nmol/L濃度組在6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)時(shí)與對(duì)照組在同時(shí)間段時(shí)比較具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,400nmol/L組在各時(shí)間段IL-11、IL-6的濃度均比200nmol/L組下降,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,100nmol/