甲基蓮心堿聯(lián)合伊馬替尼對(duì)CML原代細(xì)胞PI3K-AKT通路的影響.pdf

1、目的：研究甲基蓮心堿(Nef)與伊馬替尼(Imatinib)對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)原代細(xì)胞PI3K/AKT通道的影響，進(jìn)一步探討Nef增強(qiáng)Imatinib對(duì)CML原代細(xì)胞敏感性的作用機(jī)制，奠定Nef作為增敏劑的藥理基礎(chǔ)，為CML臨床治療提供新思路。
　　方法：①采用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測(cè)PI3K/AKT通路上游主要基因(bcr/abl、PTEN與SH

2、IP)、通路中重要信號(hào)分子(PI3K與Akt)以及下游分子(mTOR與Bel-2家族)基因表達(dá)水平。②蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-Blotting)法檢測(cè)PI3K/AKT通路關(guān)鍵中樞基因Akt總蛋白和磷酸化蛋白(p-Akt)相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：⑴Nef與Imatinib分別能下調(diào)PI3K/AKT通路上游bcr/abl mRNA表達(dá)水平，二者聯(lián)合下調(diào)更明顯（P＜0.01）。⑵Nef(4μM)組除外，負(fù)調(diào)控基因PTEN在單藥

3、組和聯(lián)合組中mRNA表達(dá)水平較control組高。Nef(4μM)與Imatinib聯(lián)合后較Imatinib單藥組顯著上調(diào)該基因mRNA表達(dá)水平(P＜0.05），而Nef(8μM)聯(lián)合組上調(diào)更明顯(P＜0.01)。⑶與control組比較，SHIP-1 mRNA在各組中表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而SHIP-2基因在單藥組和聯(lián)合組中mRNA表達(dá)水平均比control組高且有顯著差異(P＜0.05)。Nef(8μM)組、Nef(4μ

4、M）與Imatinib聯(lián)合組、Nef(8μ M)與Imatinib聯(lián)合組均較Imatinib單藥組顯著上調(diào)SHIP-2 mRNA表達(dá)水平(P＜0.05)。⑷相關(guān)性分析顯示:bcr/abl與PTEN和SHIP-2 mRNA表達(dá)水平呈直線負(fù)相關(guān)(Pearson相關(guān)系數(shù)分別為:R=-0.708，P＜0.01;R=-0.586，P＜0.01)。⑸Nef與Imatinib對(duì)通路中PIK3 CA mRNA與Akt mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著影響，對(duì)Ak

5、t總蛋白表達(dá)水平也無(wú)顯著影響（P＞0.05）。但除Nef(4μM)組以外，各單藥組與聯(lián)合組中p-Akt蛋白表達(dá)水平均比control組低(P＜0.01);而聯(lián)合組P-Akt蛋白表達(dá)水平較Imatinib單藥組降低更明顯（P＜0.05）。⑹Nef對(duì)通路中mTOR mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著影響(P＞0.05)，但與Imatinib聯(lián)合后該基因表達(dá)水平顯著下調(diào)(P＜0.05)。⑺Nef對(duì)通路下游Bcl-2家族成員Bcl-2 mRNA和Bcl-x

6、L mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著影響(P＞0.05);但與Imatinib聯(lián)合能顯著下調(diào)兩基因mRNA表達(dá)水平(P＜0.01)。⑻家族中另一成員Bax基因在各組中mRNA表達(dá)水平均較control組高;而Nef(8μM)單藥組以及Nef(8μM)與Imatinib聯(lián)合組較Imatinib單藥組顯著上調(diào)Bax mRNA表達(dá)水平(P＜0.05)。⑼Nef可上調(diào)Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL基因表達(dá)水平比值(P＜0.05)，與Imatin

7、ib聯(lián)合后上調(diào)更顯著(P＜0.01)。
　　結(jié)論：①Nef與Imatinib均能降低CML原代細(xì)胞PI3K/AKT通路上游bcr/abl mRNA表達(dá)水平;還可上調(diào)負(fù)調(diào)控基因PTEN mRNA與SHIP-2mRNA表達(dá)水平，但其對(duì)SHIP-1基因表達(dá)影響不明顯。Bcr/abl與PTEN和SHIP-2基因表達(dá)水平呈直線負(fù)相關(guān)。②Nef與Imatinib對(duì)通路中PIK3CA mRNA和Akt mRNA表達(dá)影響不明顯，對(duì)Akt總蛋白表達(dá)