亞硒酸鈉抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)其凋亡的探討.pdf

1、目的：觀察亞硒酸鈉對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響，探討亞硒酸鈉抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的分子機(jī)制。 方法：1．MTT法檢測(cè)不同濃度亞硒酸鈉處理K562細(xì)胞24h，48h，72h后細(xì)胞增殖情況。2．聯(lián)合應(yīng)用Annexin V-FITC/PI雙染法，電子顯微鏡和TUNEL 法檢測(cè)亞硒酸鈉對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響。3．流式細(xì)胞儀測(cè)定亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞24h后細(xì)胞周期變化。4．分光光度法測(cè)定亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞48h

2、后caspase-3，-8,-9活性。5．RT-PCR測(cè)定亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞48h后Bcl-2，Bax，p21 mRNA的表達(dá)。6．流式細(xì)儀測(cè)定亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞6h，12h，24h，36h，48h，細(xì)胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度。 結(jié)果：1．亞硒酸鈉能抑制K562細(xì)胞增殖，其作用呈現(xiàn)出一定的時(shí)效和劑量關(guān)系。2．Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示，20μmol/L亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞48h能誘

3、導(dǎo)其凋亡，細(xì)胞凋亡率為(25.93±0.22)％，與對(duì)照組比較，差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。20μmol/L亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞48h電子顯微鏡觀察出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，包括核固縮、核碎裂、核扭曲等，同時(shí)TUNEL法檢測(cè)可見(jiàn)典型的核深染TUNEL細(xì)胞。3．亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞24h，S期細(xì)胞百分比增高，細(xì)胞阻滯于S期。4．20μmol/L亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞48h，caspase-3，-8,-9活性明顯

4、升高，與對(duì)照組比較，差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。5．20μmol/L亞硒酸鈉處理K562細(xì)胞48h，Bcl-2 mRNA表達(dá)水平明顯降低，Bax，p21 mRNA表達(dá)水平顯著升高。6.20μmol/L亞硒酸鈉作用K562細(xì)胞6h，12h，24h，36h，48h，各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度均明顯升高，與對(duì)照組比較，具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論：1．亞硒酸鈉能抑制K562細(xì)胞增殖，其作用呈