ANS和UFGT基因沉默及對(duì)采后草莓花色苷代謝的影響.pdf

1、果實(shí)的采后色澤是反映果實(shí)品質(zhì)和貯藏性的重要指標(biāo)，在采后貯藏過程中草莓果實(shí)出現(xiàn)顏色加深甚至變暗的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響其商品性，但是，目前關(guān)于采后草莓色澤變化的影響因素及這些因素是如何影響采后色澤的研究還不夠深入。本試驗(yàn)利用VIGS技術(shù)，沉默草莓花色苷合成途徑中的ANS和UFGT關(guān)鍵酶基因，構(gòu)建這兩個(gè)基因的TRV干擾載體并轉(zhuǎn)染“甜查理”品種大綠果時(shí)期草莓果實(shí)，于對(duì)照果實(shí)全紅期時(shí)采摘，然后在常溫25℃貯藏，測(cè)定貯藏過程中果實(shí)的相關(guān)生理指標(biāo)、花色苷相

2、關(guān)代謝物質(zhì)含量及相關(guān)基因表達(dá)量的變化，探討ANS和UFGT基因沉默對(duì)采后果實(shí)花色苷代謝及相關(guān)基因的影響。主要研究結(jié)果如下：
　　1.通過TRV pYY13為干擾載體，采用LIC的方法進(jìn)行ANS和UFGT基因克隆，以轉(zhuǎn)色期草莓果實(shí)的cDNA為模板分別克隆出長(zhǎng)為547bp的FaANS和468bp的FaUFGT的特異基因片段，成功構(gòu)建VIGS干擾載體并轉(zhuǎn)染草莓果實(shí)。
　　2.基因沉默的果實(shí)從表型變化、sqRT-PCR和 qRT-P

3、CR分子水平均驗(yàn)證果實(shí)ANS和UFGT基因沉默成功。其中，ANSi果實(shí)中ANS基因表達(dá)水平下調(diào)，僅為對(duì)照果實(shí)的17.5％，UFGTi果實(shí)中UFGT基因表達(dá)水平也下調(diào)，為對(duì)照果實(shí)的28.3%；基因沉默后果實(shí)中花色苷代謝相關(guān)物質(zhì)含量顯著下降，說明ANS和UFGT基因與花色苷相關(guān)代謝有重要影響，同時(shí)基因沉默后 FaF3’H基因分別上調(diào)，推測(cè) ANS和UFGT基因沉默在降低花色苷積累的同時(shí)能促進(jìn)槲皮素等黃酮醇類物質(zhì)的合成。
　　3.測(cè)定貯

4、藏期間相關(guān)生理指標(biāo)結(jié)果表明，ANS和UFGT基因沉默對(duì)果實(shí)中TA含量、pH值、TSS、總糖和還原糖含量上升有抑制作用，并且維生素C含量高于對(duì)照果，說明ANS和UFGT基因沉默對(duì)采后草莓果實(shí)的衰老有一定抑制作用。
　　4. HPLC檢測(cè)果實(shí)貯藏期間花色苷代謝相關(guān)物質(zhì)含量結(jié)果表明，ANSi和UFGTi果實(shí)中花色苷含量、黃烷-3-醇類含量明顯低于對(duì)照果，而黃酮醇類含量和對(duì)照果持平甚至更高，說明果實(shí)中ANS和UFGT基因沉默阻斷了采后花色