不同病理類型膠質(zhì)瘤標(biāo)本MiRNA表達(dá)譜分析及MiR-125A-5p在GBM中生物學(xué)功能的研究.pdf

1、背景:高級(jí)別膠質(zhì)瘤是成人最常見(jiàn)的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤。盡管近年來(lái)針對(duì)其手術(shù)、放療及化療等治療方案均取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，患者的整體生存率依然較低，預(yù)后極差。世界衛(wèi)生組織(WHO)依據(jù)組織病理學(xué)將其分為4級(jí)，其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是其中最常見(jiàn)、惡性程度最高的一類。GBM患者預(yù)后極差，其中位生存期為14.6個(gè)月，中位無(wú)進(jìn)展生存期為6.9個(gè)月，5年生存率為9.8％。
　　MicroRNA(MiRNA)是一種不參與蛋白質(zhì)編碼的小分子RNA，

2、通過(guò)與靶基因mRNA3'-UTR序列互補(bǔ)的結(jié)合，抑制其表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的負(fù)調(diào)控作用。最近的研究表明MiRNA的表達(dá)譜異常具有腫瘤特異性，并通過(guò)影響關(guān)鍵致癌/抑癌基因的表達(dá)參與腫瘤的發(fā)生、侵襲、抗凋亡等多種進(jìn)程。有證據(jù)表明單個(gè)MiRNA可影響多個(gè)靶基因的表達(dá)。目前，已有多個(gè)針對(duì)膠質(zhì)瘤與不同正常腦組織間MiRNA表達(dá)譜的差異的研究，均表現(xiàn)出了表達(dá)譜的差異，其在腫瘤進(jìn)展中的作用機(jī)制尚不完全明了。因此，發(fā)現(xiàn)并對(duì)在膠質(zhì)瘤中差異表達(dá)的MiRNA及

3、其涉及的靶基因進(jìn)行深入研究有助于揭示其在細(xì)胞遷移、侵襲細(xì)胞骨架重排及血管形成中的作用，最終實(shí)現(xiàn)在診斷、治療中的應(yīng)用。
　　目的:針對(duì)不同病理類型膠質(zhì)瘤樣本MiRNA結(jié)果的篩查，篩選差異表達(dá)的MiRNA，用以發(fā)現(xiàn)新的膠質(zhì)瘤相關(guān)MiRNA并結(jié)合其表達(dá)模式推測(cè)其在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。深入研究MiR-125a-5p在GBM中的功能，并通過(guò)生物信息學(xué)的方式對(duì)其靶基因做出預(yù)測(cè)。
　　方法:分析膠質(zhì)瘤MiRNA數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出與病理類型

4、相關(guān)的MiRNA。收集各種病理類型膠質(zhì)瘤標(biāo)本，并用qRT-PCR方法驗(yàn)證其表達(dá)量。向GBM細(xì)胞株轉(zhuǎn)染外源性MiR-125a-5p mimics，通過(guò)MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)與transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力有無(wú)改變;應(yīng)用生物信息學(xué)方法，預(yù)測(cè)侵襲相關(guān)GMBMiRNAs可能的靶基因。
　　結(jié)果:(1)在膠質(zhì)瘤組織中發(fā)現(xiàn)42個(gè)在不同病理類型膠質(zhì)瘤中特異性表達(dá)的MiRNA，其中特異性下調(diào)的有7個(gè)，特異性上調(diào)的有

5、35個(gè)。(2) qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果與基因芯片結(jié)果相符，MiR-125a-5p在A/O等惡性程度較低的膠質(zhì)瘤中無(wú)明顯下調(diào)，在AA/AOA/AO/GBM等惡性程度較高的膠質(zhì)瘤中下調(diào)明顯。其表達(dá)與MGMT的表達(dá)有相關(guān)性。(3)與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染MiR-125a-5pmimics后96小時(shí)內(nèi)細(xì)胞增殖力的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(4)與陰性和空白對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染MiR-125a-5p mimics的GBM8401細(xì)胞侵襲及遷移能力明

6、顯增強(qiáng)(P＜0.01);(5) MiR-125a-5p有多個(gè)靶基因，可能參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、轉(zhuǎn)錄和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種過(guò)程相關(guān)。
　　結(jié)論:1.在膠質(zhì)瘤組織中發(fā)現(xiàn)42個(gè)在不同病理類型膠質(zhì)瘤中特異性表達(dá)的MiRNA，其中特異性下調(diào)的有7個(gè)，特異性上調(diào)的有35個(gè)。
　　2.MiR-125a-5p在A/O等惡性程度較低的膠質(zhì)瘤中無(wú)明顯下調(diào)，在AA/AOA/AO/GBM等惡性程度較高的膠質(zhì)瘤中下調(diào)明顯。其表達(dá)與MGMT的表達(dá)有相