CLU基因多態(tài)性與漢族人阿爾茨海默病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:通過檢測聚集素基因(Clusterin gene，CLU)單核苷酸多態(tài)位點(SNPs)，探討其與中國北方漢族人群晚發(fā)型阿爾茨海默病(late onset Alzheimer'sdisease，LOAD)的相互關(guān)系。
　　方法:1、應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)（iMLDRTM多重SNP分型技術(shù)，PCR-LDR）方法，我們對隨機選取的50例LOAD患者及年齡和性別相匹配的50例健康老年人進行全面的CLU基因測序，并篩選

2、CLU基因啟動子、全部外顯子及包括剪切位點的側(cè)翼區(qū)等全部功能性區(qū)域的功能性單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs)。根據(jù)這100個樣本的所有基因型數(shù)據(jù)，通過Haploview4.2軟件作圖分析，并根據(jù)最小等位基因不小于0.05(MAF≥0.05)和r2＞0.82的原則和標(biāo)準(zhǔn)進一步篩選出功能性的SNP位點。2、應(yīng)用大樣本病例對照的研究方法，我們共入選LOAD患者796例，同期年齡和性別完全匹配的對照組796例。多態(tài)性基因分型分析采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-

3、連接酶檢測反應(yīng)(PCR-LDR)技術(shù)，檢測篩選的部分CLU基因多態(tài)性位點的基因型、等位基因多態(tài)性的分布，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(PCR-LDR)檢測APOE的基因型并分型。SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對照組的比較采用卡方檢驗。進一步結(jié)合研究人群的APOE分型，計算比值比(OR)和95％可信區(qū)間，進行多因素logistic回歸分析來校正性別、年齡和APOE□4基因型，以確立與AD發(fā)病顯著關(guān)聯(lián)的獨立遺傳風(fēng)險因

4、子。
　　結(jié)果:1、經(jīng)過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(PCR-LDR)測序方法，在小樣本中，初步得到18個功能性的SNP位點，其中11個為SNP數(shù)據(jù)庫中已知的SNP，另外7個是新發(fā)現(xiàn)的、極低頻的多態(tài)位點。根據(jù)以上的標(biāo)準(zhǔn)和原則進一步篩選出11個功能性SNP位點:rs881146，rs7012010，rs17466684，rs17057441，rs2279591，rs9331949,rs9331942，rs3087554，rs3

5、216167，rs7982，rs1532278。2、如預(yù)期所料，對兩組受試者進行APOE基因分型后，APOE□4等位基因攜帶者中患晚發(fā)型阿爾茨海默病的風(fēng)險較APOE□4的非攜帶者顯著增高(OR=1.854，95％ CI=1.443-2.382，P＜0.001)。3、在全部樣本中，通過對篩選出的11個功能性SNP位點的基因檢測，我們發(fā)現(xiàn)兩組間只有位于3'非翻譯區(qū)域的rs9331949多態(tài)性位點的等位基因和基因型有顯著性差異(等位基因，P=

6、0.003;基因型，P=0.006)，其中最小等位基因C在LOAD中的發(fā)生率明顯的高于對照組(OR=1.286，95％CI=1.088-1.519，P＜0.001)。進一步按照是否攜帶APOE□4等位基因進行分組后，rs9331949的最小等位基因C在APOE□4等位基因攜帶者中的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.625;95％CI=1.087-2.430)仍然明顯高于APOE□4非攜帶(OR=1.232;95％CI=1.023-1.484)。多因素

7、Logistic回歸分析顯示，在平衡了“性別”、“年齡”、“APOE□4基因型”等因素后，攜帶rs9331949最小等位基因C能明顯增加LOAD發(fā)病風(fēng)險。而且不論在疊加模型、顯性模型還是在隱性模型中，在阿爾茨海默病患者組和對照組中均存在明顯的差異性:疊加模型P值=0.004，比值比(OR)=1.274;顯性模型P=0.039，OR=1.239;隱性模型P=0.002，OR=1.975。rs9331949多態(tài)性位點的最小等位基因C在三種遺

8、傳模型中均能夠增加阿爾茨海默病的危險性。此外，多態(tài)性位點單倍體型分析中發(fā)現(xiàn)CG-Hap2、TG-Hap3、CA-Hap4單倍體型與LOAD相關(guān)聯(lián)，其中Hap2、Hap4為危險性單倍體型，而Hap3為保護性單倍體型。
　　結(jié)論:本實驗結(jié)果表明，在中國北方漢族人群中，ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān)，APOE□4等位基因攜帶者患晚發(fā)型阿爾茨海默病的風(fēng)險明顯升高。在中國北方漢族人群中，CLU基因的單核苷酸多態(tài)性位點與晚發(fā)型阿爾茨海